麝香酮干预p53-p21及凋亡信号通路基因表达谱的研究

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麝香酮是天然麝香和麝鼠香的主要功能成分,有特殊香味,具有一定的药理活性,对中枢神经系统、呼吸和循环系统也有一定的影响。麝香酮对动物的条件反应有影响,且随剂量而改变。p53基因在机体组织细胞的生长、发育与分化等过程中起重要作用。其主要生物学功能是维持细胞基因组的稳定,负责调节细胞的生长和诱导细胞的凋亡。激活的p53可以抑制细胞转化,诱导细胞生长停滞、细胞凋亡,启动DNA损伤修复。本研究通过在培养细胞过程中加入不同剂量的麝香酮进行干预实验,通过荧光定量PCR技术检测p53介导的重要细胞周期和凋亡通路相关基因的表达,探讨其不同剂量对这些基因mRNA表达的影响规律,从而了解其对细胞的影响。本实验使用HEK293T细胞,将复苏后传至第3代的细胞分为9组,分别为添加1μg/ml麝香酮组、5μg/ml麝香酮组、10μg/ml麝香酮组、15μg/ml麝香酮组、20μg/ml麝香酮组、25μg/ml麝香酮组、30μg/ml麝香酮组、0.1%DMSO对照组和空白对照组,并记为T1、T5、T10、T15、T20、T25、T30、TDM和TK。每组设置3个生物学重复。与0.1%DMSO对照组比较,统计分析p53、有关细胞周期的p21、RPRM、GTSE1、CCND1、CDK4、CCNE1、CDK2、CCNB1 和 CDK1 基因与有关细胞凋亡的 BCL2、BCL2L2、BAX、BID、FAS、CASP3、CASP8、CASP9、TNFRSF10B 和 APAF1 基因的转录水平的变化。结果显示,T1、T5、T10、T15、T20、T25和T30实验组p53基因的转录水平分别为TDM对照组的1.05倍、0.93倍、1.1倍、1.39倍、1.49倍、1.68倍和1.84倍。麝香酮对细胞的作用随着剂量的改变而改变,低浓度(1μg/ml~1 0μg/ml)促进细胞生长抗凋亡,高浓度(15μg/m1~30μg/ml)抑制细胞生长甚至促使细胞凋亡。麝香酮对p53基因介导的细胞周期和细胞凋亡调节过程中的重要基因如p21基因、CDK基因、BCL2基因和CASP3基因等的转录水平造成影响,低浓度下促进细胞生长的相关基因表达上调,高浓度下凋亡相关基因表达上调,表达差异显著(P<0.05)。
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