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利用人工病原诱导启动子调控外源抗病基因高效表达是增强植物抗病性的重要手段之一。但是,转基因抗病需要解决两个关键问题,即如何选择外源抗病基因和怎样实现精确表达。本实验室已通过自由组合F-box、GST1-box、S-box和W-box顺式作用元件二聚体与35S最小启动子,构建了人工病原物诱导启动子WGFS-mini35S。在此基础上,本试验做了以下研究：1.以尾巨桉、粗皮桉、尾叶桉的叶片以及尾叶桉种子苗下胚轴作外植体培养得到的绿、红、白三种颜色的的愈伤组织为材料,对四个内参基因(RTEF、RARS、EACT、 AACT)的稳定性和适用性进行评估,得到RTEF的稳定性最好,最适合做qPCR内参基因。2.以尾巨桉叶片为材料,通过瞬时表达分析了人工启动子WGFS-mini35S的诱导活性。分析结果表明,WGFS-mini35S启动子的本底表达活性是35S启动子的0.2951倍;当受到疫霉菌孢子诱导后,WGFS-mini35S启动子诱导活性有明显升高诱导活性为35S启动子的2.36倍,相对于本底表达来说提高到7.87倍；当受到水杨酸诱导后,WGFS-mini35S启动子诱导活性也有所升高。3.成功构建了WGFS-mini35S-npr1表达载体,并将其转化进农杆菌GV3101中。4.通过花序浸染法转化拟南芥,成功将植物表达WGFS-mini35S-npr1和35S-npr1(实验室保存)成功转化进拟南芥中,经PCR检测分别得到两种拟南芥转基因植株。5.观察转基因拟南芥的生长形态,发现WGFS-mini35S-npr1转基因拟南芥与35S转基因拟南芥相比,主根更长,且侧根更发达。6.经水杨酸处理野生型拟南芥和转化得到的两种转基因拟南芥植株的叶片,疫霉菌和青枯菌处理转基因WGFS-mini35S拟南芥植株的叶片,进行qPCR分析。结果显示35S, WGFS-mini35S转基因拟南芥的相对CK本底表达量倍数分别是2.99倍和6倍：水杨酸处理野生型拟南芥、35S和WGFS-mini35S转基因拟南芥叶片后,NPR1基因的相对CK表达量倍数分别2.56倍、5.67倍和14.31倍。用疫霉菌和青枯菌处理WGFS-mini35S转基因拟南芥叶片后,NPR1相对CK的本底表达量倍数分别为1.96和2.43倍。说明人工启动子转基因拟南芥能同时受到水杨酸、疫霉菌和青枯菌的高效诱导。