桑黄菌丝体多糖的制备、理化性质及抗氧化活性研究

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桑黄(Phellinus linteus)是一种珍稀的药用真菌,多糖是主要活性成分之一,具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、降血糖等生物活性和药理作用。然而,日前国内外研究桑黄多糖还主要以水提物或水提多糖为主,限制了桑黄多糖的深度开发及应用。本文以桑黄菌丝体为原料,采用不同提取介质连续制备三种活性多糖,分析和比较多糖的理化性质、分子特性和抗氧化活性,筛选高活性桑黄多糖,研究活性多糖的分离纯化、结构表征和生物活性。主要研究结果如下:  采用热水、1%(NH4)2C2O4和1.25 M NaOH/0.05% NaBH4连续从桑黄菌丝体中得到PL-W、PL-A和PL-N三种活性多糖。理化性质研究表明,PL-W和PL-A主要由葡萄糖组成,PL-N主要由木糖和阿拉伯糖组成且多糖含量和糖醛酸含量最高。PL-W和PL-N主要由高分子量组分构成,而PL-A主要由低分子量组分构成。在水溶液中,三种多糖均呈紧密的无规线团链构象。  通过体外抗氧化模型,研究发现,桑黄菌丝体多糖PL-W、PL-A和PL-N均能较好地清除DPPH、(·)OH、ABTS(·)+自由基和还原三价铁离子,同时,对H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞起保护作用。其中,PL-N较PL-W和PL-A具有明显的清除自由基能力和体外抗氧化活性,且呈剂效依赖关系,可作为功能性食品应用于膳食、理疗中。  利用D-半乳糖所致的动物亚急性衰老模型,综合评价碱提桑黄菌丝体多糖PL-N的体内抗氧化活性。研究发现,PL-N灌胃40天后,小鼠(胸腺、脾脏、肝脏)脏器指数,肝脏和血清中的抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性均显著增加(p<0.05、p<0.01或p<0.001);MDA含量显著降低(p<0.05、p<0.01或p<0.001);小鼠肝脏中总抗氧化能力(TAOC)能力显著提高(p<0.05、p<0.01或p<0.001)。这些结果揭示PL-N具有明显的体内抗氧化活性。  运用DEAE-Sephadex A-25 fast flow柱层析对碱提桑黄菌丝体多糖PL-N进行分离纯化,获得均一活性组分PL-N1。通过酸水解、甲基化、凝胶渗透色谱(GPC)、气相色谱(GC)、气质联用(GC-MS)、红外光谱和核磁共振等方法推断了PL-N1的化学结构,研究表明,PL-N1多糖含量为98.7%,重均分子量(Mw)为343000kDa,主要由阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖组成,分子摩尔比为4.0∶6.7∶1.3∶1.0,骨架结构为(1→4)-β-D-吡喃木糖残基、(1→2)-α-D-吡喃木糖残基、(1→4)-α-D-吡喃葡萄糖残基、(1→5)-β-D-呋喃阿拉伯糖残基、O-2分支上的(1→4)-β-D-吡喃木糖残基和O-6分支上的(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖残基,分支结构由(1→)-α-D-呋喃阿拉伯糖残基组成,是已报道桑黄菌中发现的一新的多糖重复结构单元。
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