论文部分内容阅读
目的:吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barrés syndrome,GBS)是一种自身免疫性疾病,是目前世界上引起急性肢体迟缓性瘫痪的最主要原因之一,目前治疗方法主要为血浆置换(plasma exchange,PE)及静注免疫球蛋白(intravenousimmunoglobulin,IVIg),尽管接受上述治疗,仍有患者预后不良或留有严重后遗症,因此GBS新的治疗方法的探索仍是目前神经病学亟待解决的问题。本研究拟通过观察银杏内酯在EAN中的作用及其可能机制,为未来GBS治疗新方法的探索奠定一定的理论基础。我们通过建立其动物模型,即实验性自身免疫性神经炎(experimental autoimmune neuritis,EAN),根据EAN的临床评分、坐骨神经病理及免疫学指标来评价银杏内酯在GBS的潜在治疗作用。研究方法:(1)实验动物及分组:选择6-8周雄性C57BL/6小鼠,体重约18-20g,购于北京维通利华实验动物技术有限公司,动物随机分为对照组:EAN+PBS组(n=7),EAN+银杏内酯低剂量(5mg/kg/d)组(n=7),EAN+银杏内酯高剂量(10mg/kg/d)组(n=7)。(2)EAN模型的建立及临床评分:百日咳毒素(pertussis toxin,PTX),溶解于PTbuffer后尾静脉注射,将P0180-189的肽段、不完全弗氏佐剂及结核分枝杆菌菌素充分乳化,于背部皮下注射。(3)实验动物的干预:在EAN造模第六天,按照分组,腹腔注射PBS或者银杏内酯注射液,高峰期同时处死三组小鼠。(4)实验取材及观察指标:(1)在第一次皮下注射P0后开始观察小鼠皮毛、尾部张力、步态情况及小鼠体重变化情况,根据评分标准每天对小鼠进行临床评分。(2)取小鼠脊坐骨神经近脊髓段,通过HE和LFB病理染色,观察EAN小鼠坐骨神经炎症及髓鞘脱失的情况;(3)分离EAN小鼠脾脏,通过流式细胞术检测脾脏单个核细胞悬液(the mononuclear cells,MNCs)中Th1、Th2、Th17、Treg细胞在CD4~+T细胞的比例。结果:(1)临床评分:在发病过程中,银杏内酯治疗组小鼠临床评分均低于对照组。在建立模型第9天,低剂量银杏内酯治疗组临床评分较对照组低(p<0.05),第14-15天,低剂量和高剂量银杏内酯治疗组临床评分均比对照组低(p<0.05)。(2)EAN小鼠坐骨神经病理结果:对照组小鼠坐骨神经炎性细胞浸润及髓鞘缺失最严重,银杏内酯高剂量组次之,银杏内酯低剂量组最轻。(3)CD4+T细胞的测定:(1)银杏内酯低剂量组可下调MNCs中Th17细胞的比例,较对照组明显降低(P<0.05),也可下调脾脏MNCs中Th1细胞的比例(P>0.05)。(2)高剂量银杏内酯也可下调MNCs中Th17及Th1细胞的比例,较对照组减低(P>0.05)(3)银杏内酯低剂量组和银杏内酯高剂量组MNCs中Treg细胞的比例较对照组升高(P>0.05)。(4)银杏内酯低剂量组MNCs中Th2细胞比例较对照组减低(P>0.05),银杏内酯高剂量组MNCs中Th2细胞比例较对照组升高(P>0.05)。结论:(1)低剂量银杏内酯可以有效治疗小鼠EAN,降低临床评分,延缓高峰期,减轻周围神经炎性浸润和髓鞘脱失等周围神经组织损害。(2)低剂量银杏内酯可减轻小鼠EAN病情,可能主要通过抑制Th17细胞来发挥作用。