大鼠嗅鞘细胞的纯化及活性检测

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目的1.采用改良差速贴壁联合胰酶限时消化法纯化大鼠嗅鞘细胞并检测嗅鞘细胞纯度。2.检测上述纯化方法所得嗅鞘细胞的生物活性。方法分离新生7d的SD大鼠嗅球嗅鞘细胞,分组后采用改良差速贴壁法联合不同时段(1min﹑3min﹑5min)胰酶消化法纯化培养,观察不同时段纯化的嗅鞘细胞的形态特点及生长情况;应用免疫荧光法检测细胞膜受体NGFRP75并评估细胞纯度;应用CCK-8法和酶联免疫吸附法分别检测嗅鞘细胞在纯化后3d-15d的增殖活性和分泌脑源性神经营养因子的含量。结果改良差速贴壁联合胰酶限时消化1min﹑3min﹑5min法所得嗅鞘细胞纯度分别为(57.52±2.13)%、(78.95±2.60)%、(49.01±0.74)%,组间两两比较有统计学意义(P<0.05);改良差速贴壁法联合胰酶限时消化1min﹑3min﹑5min法所得嗅鞘细胞在纯化后7d﹑9d﹑11d时的细胞数目和脑源性神经营养因子分泌量显示3min组最优,组间比较有统计学意义(F=4.944P<0.05)。结论1.改良差速贴壁(6h+18h)联合胰酶限时消化3min的纯化方法能获得较高纯度的嗅鞘细胞;2.通过该方法获得的嗅鞘细胞在纯化后7d-11d时处于细胞生长的对数期,此期内细胞增殖及分泌脑源性神经营养因子能力最强。
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