本研究旨在探究鸡肠道中尿酸对肠道氧化应激的影响及作用机制,以检验其是否参与肠道抗氧化行为,并探究肠道组织尿酸的合成机理及主动防御能力,为肠道抗氧化系统的构成和防御能力提供了新的理论依据,同时对尿酸在肠道的生物学功能进行了初步探究,开启了肠道中尿酸相关研究的新领域。试验一前体物对肠上皮细胞尿酸合成的影响。采集42日龄肉鸡小肠及食糜,肝脏、肾脏、胆囊、胰腺,检测尿酸合成通路关键酶表达水平及尿酸、尿囊素在肠道的分布。结果表明,嘌呤核苷酸从头合成关键酶在小肠表达非常低,而嘌呤核苷酸补救合成及分解途径关键酶均能够表达,特别是APRT、ADA、GDA、XDH mRNA丰度较高。小肠前端尿酸转运体mRNA水平、尿酸与尿囊素含量显著高于肠道后端。使用0、100μM、1mM、10 mM的次黄嘌呤或肌苷处理肠上皮细胞24 h或36 h,收集培养液和细胞,检测尿酸量、尿酸合成关键酶及转运体表达水平。结果发现,次黄嘌呤和肌苷处理均能显著增加肠上皮细胞内外的尿酸量。使用0、100μM、1 mM肌苷处理离体培养的十二指肠2 h,分别收集肠囊内外的培养液,检测尿酸含量。结果发现,肌苷显著增加了十二指肠尿酸的分泌量。以上结果表明,小肠可能主要通过嘌呤补救合成-分解途径合成尿酸,肠道是产生尿酸的重要器官。试验二鸡肠上皮细胞急性氧化应激模型的建立。选择H₂O₂造模,并对试验条件进行改进。离体培养原代肠上皮细胞,用梯度浓度H₂O₂处理2小时,检测细胞活力、抗氧化系统、LDH酶活力,选择合适的处理浓度;用选择浓度的H₂O₂进行梯度时间处理,根据细胞活力选择处理时间,并检测氧化应激标志物MDA进行模型验证。结果显示,当H₂O₂在2 mM及以上浓度时,细胞活力、抗氧化酶活力显著下降,培养液中LDH酶活力显著升高;使用2 mM H₂O₂处理肠上皮细胞2 h时,细胞活力较低,细胞MDA含量显著下降。以上结果证明,2 mM H₂O₂处理肠上皮细胞2 h,可成功构建稳定的肠上皮细胞急性氧化应激模型。试验三尿酸对肠上皮细胞氧化应激的作用。设置对照组、H₂O₂组、150μM UA+H₂O₂组、300μM UA+H₂O₂组、600μM UA+H₂O₂组、1200μM+H₂O₂组、3600μM UA+H₂O₂组,7个组。使用尿酸预处理肠上皮细胞6 h后,使用2 mM的H₂O₂应激处理2 h,检测细胞活力、氧化应激标志物、抗氧化系统、Nrf2-ARE通路表达水平。结果表明,与H₂O₂处理组相比,尿酸处理使细胞活力显著回升,细胞MDA、蛋白质羰基含量显著降低,抗氧化系统表达显著增强。与对照组相比,H₂O₂组细胞核内Nrf2水平显著升高;而与H₂O₂组相比,尿酸预处理使核内Nrf2水平显著升高,部分靶基因表达水平显著升高。以上结果证明,尿酸能够通过Nrf2-ARE通路显著增强肠上皮细胞的抗氧化能力,缓解肠上皮细胞的氧化应激。试验四鸡肠道急性氧化应激对尿酸合成能力的影响。使用2 mL浓度为0、0.32、0.8、2、5 mg/m L的Fe²⁺灌服1日龄蛋公雏,4 h后采集鸡的小肠,检测氧化应激标志物、抗氧化系统、Nrf2-ARE通路表达,并对尿酸合成通路关键酶基因表达进行检测。结果表明,在十二指肠,2 mg/mL及以上浓度的Fe²⁺显著增加MDA、蛋白质羰基的产生,显著降低抗氧化酶的活力,使Nrf2-ARE通路信号减弱,同时小肠绒毛V/C显著降低。对尿酸合成关键酶基因表达的检测结果发现,灌服2 mg/mL及以上浓度的Fe²⁺使合成尿酸的关键酶的基因表达水平显著下降。使用0、250μM、500μM、1 mM、2 mM H₂O₂处理肠上皮细胞2 h,检测尿酸合成相关酶及转运体表达。结果发现,低浓度时XDH、SLC2A9 mRNA表达水平显著升高,而2 mM H₂O₂使细胞尿酸合成相关酶及转运体基因表达水平显著下降。结果提示,氧化应激显著降低肠道尿酸合成的能力。试验五低水平氧化刺激对肠上皮细胞尿酸合成的影响。使用浓度为0、50μM、100μM、200μM、400μM的H₂O₂处理肠上皮细胞36 h,收集细胞和上清,检测尿酸含量、肠上皮细胞尿酸合成关键酶及尿酸转运体表达水平。结果表明,H₂O₂处理显著增加细胞内外的尿酸量和XDH mRNA表达水平,转运体基因ABCC4 mRNA水平随H₂O₂浓度升高而显著增加。借助外翻肠囊法离体培养十二指肠,使用0、50μM、200μM H₂O₂处理十二指肠2 h,分别收集肠囊内外的培养液,检测尿酸含量。结果表明,低浓度H₂O₂使十二指肠尿酸分泌量显著升高。以上结果证明,低水平氧化刺激促进肠上皮细胞尿酸的合成、分泌。