论文部分内容阅读
目的:探讨过表达RN181对肝癌细胞Hep G2凋亡及自噬的影响。方法:通过瞬时转染,过表达RN181于肝癌细胞Hep G2,常规培养,转染24 h和48 h后,荧光显微镜下拍照,Western blot验证RN181过表达水平。过表达RN181成功后,流式细胞仪检测细胞凋亡的情况;Western blot检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2和自噬相关蛋白beclin1和p62的表达;加入p38-MAPK激动剂茴香霉素(Anisomycin),Western blot检测p38-MAPK的磷酸化水平,流式细胞仪检测凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3,bax和bcl-2的表达,检测自噬相关蛋白beclin1和p62的表达。结果:1.过表达RN181后,流式细胞术结果提示,过表达RN181组(凋亡率为54.76±1.8%),与对照组(凋亡率为40.9±0.78%)比较,凋亡率有显著增加(P<0.01),提示过表达RN181促进肝癌细胞Hep G2的凋亡。Western blot结果示过表达RN181组相较于对照组,显著上调bax蛋白的表达(P<0.05),以及显著下调bcl-2蛋白表达(P<0.05),提示过表达RN181可以促进肝癌细胞Hep G2的凋亡。2.Western blot结果提示,过表达RN181组相较于对照组,显著上调beclin1蛋白的表达(P<0.05),以及显著下调p62蛋白表达(P<0.01),提示过表达RN181可以促进肝癌细胞Hep G2的自噬。3.Western blot结果提示,与对照组相比,过表达RN181明显下调磷酸化p38-MAPK(简称P-p38)蛋白的表达水平(P<0.05),同时单独茴香霉素处理(80 ng/m L,0.5 h),P-p38蛋白表达量明显升高(P<0.05)。加入茴香霉素后,Western blot结果表明,与过表达RN181组比较,过表达RN181+茴香霉素共处理组的bax、Cleaved Caspase-3和beclin1蛋白表达水平均明显下降(P<0.01),同时bcl-2蛋白表达量明显增加(P<0.01),以及p62蛋白表达量明显增加(P<0.001);。上述结果提示,p38-MAPK通路介导了RN181促进肝癌Hep G2细胞凋亡和自噬作用。结论:RN181通过抑制p38-MAPK通路促进肝癌细胞Hep G2的凋亡与自噬。