论文部分内容阅读
目的：明确雌激素对L型钙通道电流的调控作用以及对L型钙通道蛋白水平的影响。方法：1.将新生Sprague-Dawley（SD）大鼠皮层神经元培养，定期倒置显微镜观察细胞形态及走形，第7天行免疫荧光神经元鉴定。2.以新生大鼠原代皮层神经元为研究对象，培养至7天左右时给予干预，实验设溶剂对照组及雌激素E2（1umol/L）组，干预72小时后采用全细胞膜片钳技术测定L型钙通道电流。3.培养至第7天左右神经元给予干预，实验设溶剂对照组、雌激素受体拮抗剂ICI182780（简称ICI，100nmol/L）组、雌激素E2（1umol/L）组及雌激素E2（1umol/L）加雌激素拮抗剂ICI182780（100nmol/L）组，干预72小时后提取细胞蛋白用蛋白免疫印记Western blot方法检测神经元总Cav1.2量的变化。结果：1、培养第7天的细胞胞体饱满，折光性强，走形良好，轴突密集形成网状结构，免疫荧光结果显示大部分细胞MAP-2染色阳性（红染），为神经元细胞，形态良好。2.全细胞膜片钳结果显示雌激素处理组L型钙通道电流较对照组神经元电流明显减少（P＜0.05），3.蛋白免疫印迹Westernblot结果提示雌激素处理后Cav1.2的量明显减少（P＜0.01），正常组与雌激素受体拮抗剂ICI、雌激素加ICI组无明显差异（P＞0.05）。结论：1.原代皮层神经元细胞培养成功。2.雌激素处理可以减少神经元L型钙通道电流。3.雌激素处理减少了原代皮层神经元LTCC蛋白Cav1.2