肾癌是泌尿系统中第三大肿瘤，全球范围内每年约有120,000例患者死于肾癌，并且有显著增加的趋势。肾细胞癌是成年人肾癌的最主要的类型，约占全部肾癌的90%，是肾癌发病率和死亡率主要的原因。EZH2基因是PRC复合体中的核心成员，发挥组蛋白甲基化转移酶的作用，能够在组蛋白H3的27位赖氨酸上直接加入甲基，从而沉默基因的表达，包括肿瘤抑癌基因。EZH2基因表达失调与多种癌症的发生相关，但在肾癌特别是肾透明细胞癌中的研究很少。VEGF（Vascular endothelialgrowth factor）在肿瘤形成中血管生成中具有重要的作用，在肾癌中与肿瘤的生长、转移以及差的预后有关，并且抗VEGF在肾癌的治疗中已经被广泛应用，有研究表明EZH2和VEGF之间的表达具有调节作用，但是不同癌症中结果不一致，在肾癌中的调节作用还不是很清楚。为了研究这两个基因的病理特征和表达相关性，同时也为了更好的研究EZH2和VEGF基因在肾透明细胞癌中的作用和机制，我们收集了经病理诊断为肾透明细胞癌的患者肿瘤组织185例，10例正常肾组织作为对照，采用免疫组化芯片对EZH2和VEGF蛋白的表达进行检测，并结合患者的临床特征以及总生存期进行综合分析。为了研究EZH2和VEGF基因的功能，我们构建了EZH2基因的过表达质粒进行过表达实验，同时合成了该基因的干扰片段进行敲减实验，选取786-O细胞株分别进行了增殖、凋亡和周期的相关的实验，取得如下结果：（1）EZH2和VEGF蛋白在肾透明细胞癌患者组织中的表达检测为了检测EZH2和VEGF蛋白在肾透明细胞癌患者肿瘤组织中的表达情况，我们对185例肾透明细胞癌患者肿瘤组织和10例正常对照采用免疫组化新片的方法进行检测，芯片的结果显示，EZH2基因在癌旁对照中没有表达，而在肿瘤组织中出现表达，其中，低表达的患者有97例（97/185），高表达的患者有88例（88/185），主要表达在细胞核中，VEGF基因在癌旁和肿瘤中都有表达，在肿瘤组织中，低表达的患者有82例（82/185），高表达的患者有103例（103/185），主要表达在细胞质中。两者表达水平的相关性分析结果显示EZH2和VEGF蛋白表达水平呈显著的正相关（相关系数为0.850，P<0.001）。（2）EZH2和VEGF蛋白表达水平于临床特征以及生存期的相关性分析为了分析EZH2和VEGF与肾透明细胞癌患者临床特征之间的相关性，我们收集了患者的年龄、性别、病理等级、TNM分期以及是否出现远处转移等信息，分别与EZH2和VEGF蛋白表达水平进行相关性分析；分析结果显示，两个基因的表达水平与TNM分期显著相关。EZH2低表达的患者Ⅰ-Ⅱ期有60例（60/97），Ⅲ-Ⅳ期的有37例（37/97）；EZH2高表达的患者Ⅰ-Ⅱ期有38例（38/88），Ⅲ-Ⅳ期的有50例（50/88），差异显著（P=0.013）。VEGF低表达的患者Ⅰ-Ⅱ期有32例（32/82），Ⅲ-Ⅳ期的有50例（50/82）；VEGF高表达的患者Ⅰ-Ⅱ期有66例（66/103），Ⅲ-Ⅳ期的有37例（37/103），差异显著（P=0.001）。EZH2和VEGF蛋白表达水平与远处转移也显著相关（EZH2和VEGF的显著性分布分别为P=0.011和P=0.038）。EZH2低表达的患者主要在低级别的肿瘤中（61%），而高表达的患者主要出现在高级别肿瘤中（57%）。EZH2和VEGF高表达主要分布在出现远处转移的患者中，EZH2和VEGF出现远处转移的比例分别为62%和67%。生存期分析中可以看出，EZH2低表达的患者平均总生存期为67.2个月，而高表达的患者平均总生存期仅为34.4个月，与低表达患者的平均总生存期相比，显著下降（P<0.001）。（3）下调EZH2的表达对肾癌细胞周期、凋亡、增殖以及对VEGF表达的影响为了比较全面的探索EZH2基因在肾透明细胞癌中的作用，我们采用siRNA的方法在786-O细胞系中对EZH2基因的表达进行干扰，检测786-O细胞在周期、凋亡、增殖中的变化，同时检测下调EZH2基因的表达对VEGF表达的影响。干扰EZH2基因的表达后，无论从RNA水平还是蛋白水平都有显著的下降，并且可以显著的降低VEGF的表达。免疫荧光的结果显示，干扰EZH2的表达后，EZH2和VEGF的信号都大大降低，细胞增殖能力减弱。凋亡检测的实验中，干扰EZH2的表达可以显著的促进细胞的凋亡，Hoechst33258检测中2个干扰组的凋亡比例都增加了约2.5倍，在AnnexinV-PE的检测中凋亡细胞的比例从对照组的7.7%增加到25.9%和27.6%。细胞周期的检测结果显示干扰EZH2的表达，细胞周期出现了G1期阻滞，G1期的细胞比例从46.65%分别增加到70.65%和68.29%，G2期的细胞比例从17.30%降到4.31%和5.36%，S期细胞从36.05%降到25.04%和26.35%。（4）上调EZH2的表达对肾癌细胞周期、凋亡、增殖以及对VEGF表达的影响为了进一步探索EZH2的表达对肾癌细胞周期、凋亡、增殖以及对VEGF表达的影响，我们采用过表达的方法在肾癌细胞系786-O中上调EZH2的表达，分别检测了786-O细胞的周期、凋亡、增殖等生物学行为，同时检测了VEGF基因的表达。结果显示，上调EZH2的表达后，无论是RNA水平还是蛋白水平，EZH2和VEGF都显著的上调，免疫荧光的信号值也显著的增加，同时也可以发现EZH2蛋白主要在细胞核中表达，而VEGF蛋白主要在细胞质中表达，细胞增殖能力显著增加。凋亡检测的实验中发现，过表达EZH2的表达可以显著的降低凋亡细胞的比例，Hoechst33258检测中下降了约50%，在AnnexinV-PE的检测中凋亡细胞的比例从对照组的7.4%降低到3.4%。细胞周期检测的结果显示，过表达组中G1期细胞比例从52.71%降到31.46%，G2期细胞比例从16.62%增加到33.28%，S期的细胞比例从30.67%增加到35.26%。本研究分别从肾透明细胞癌患者的肿瘤组织和肾癌细胞系对EZH2和VEGF在肾透明细胞癌中的作用机制进行研究，结果发现，EZH2基因的表达水平与VEGF的表达水平显著相关，EZH2基因可以显著的调节VEGF基因的表达，并且两者的表达水平与肾透明细胞癌患者的TNM分期、远处转移和生存期显著相关，具有差的预后。EZH2基因的表达水平可以影响肾癌细胞的增殖、凋亡和细胞周期，在肾癌的发生中具有重要的作用。本研究揭示EZH2基因在肾透明细胞癌中的作用机制，明确了与VEGF基因之间的调节关系，为肾癌的发生提供了一个新的视野，可能为肾癌治疗的提供一个重要的线索。