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隐孢子虫病是世界范围内流行的水介寄生虫病，其病原体是顶复门、孢子虫纲、球虫亚纲、真球虫目、艾美耳亚目、隐孢子虫科、隐孢子虫属的原生动物。隐孢子虫病在家畜生产中导致了重大的经济损失。作为人兽共患的病原体，微小隐孢子虫可导致自限性腹泻在健康人群中爆发式流行；而对于免疫力低下人群，隐孢子虫感染将导致慢性的、甚至是致死性的腹泻。微小隐孢子虫卵囊可以在环境中长期存活并能抵抗常规水处理过程中的次氯酸消毒，这些特性成为控制饮用和娱乐用水中微小隐孢子虫污染的一大难题。迄今为止尚无针对微小隐孢子虫的特效药和高效预防微小隐孢子虫的疫苗，这进一步增加了防治隐孢子虫病的困难。基于可持续性发展、减少药物残留和降低药物依赖性考虑，发展微小隐孢子虫疫苗成为控制隐孢子虫病的一个绿色解决方案。植物乳酸菌作为食用益生菌，具有可口服、无毒、刺激粘膜免疫等特点，这些使其成为蛋白质及DNA口服疫苗的一个优秀的候选载体。本研究克隆微小隐孢子虫粘附相关基因文库的cp966基因，制备了cp966重组乳酸杆菌口服疫苗，观察了cp966重组乳酸杆菌口服疫苗对小鼠免疫的效果，评价了其对犊牛的免疫保护作用，取得了以下结果： cp966与GeneBank上预测的假定蛋白cgd44110基因序列的一致性达99.90%，蛋白质的序列一致性为100%，该蛋白定位在微小隐孢子虫子孢子膜上；利用cp966胞外区片段构建植物乳酸杆菌工程菌，口服免疫小鼠后，能诱发肠道粘膜免疫和体液免疫，肠道中的特异性sIgA和血液中的IgG含量均显著升高，Th2型免疫反应增强；口服免疫后可以增加小肠中TLR-4的表达，促进小鼠的先天性免疫。用cp966重组乳酸杆菌免疫犊牛后，诱导犊牛肠道粘膜免疫和体液免疫反应发生，犊牛小肠和粪便中的cp966特异性sIgA含量增多，血清中cp966特异性IgG含量上升，在人工感染微小隐孢子虫，血清中细胞因子IL-2、IL-12、IFNγ和IL-4含量上升；增加小肠粘膜中肥大细胞数量和犊牛抵抗微小隐孢子虫感染的能力；卵囊排出率平均减少67.14%，表明cp966重组植物乳酸杆菌对犊牛具有一定的免疫保护能力，免疫后可减轻微小隐孢子虫对犊牛的危害。综上所述，cp966可以作为微小隐孢子虫疫苗的候选基因。同阴性对照组和空白对照组相比，cp966重组乳酸杆菌疫苗对犊牛具有一定的保护效果，其免疫保护能力显著高于含有pW425et空载体的阴性对照组乳酸杆菌。