宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤，在女性恶性肿瘤中其发病率居第二位。目前，宫颈癌的治疗还是通过外科手术、化疗和放疗等途径，且预后效果差。多年来，天然药物的研究与开发，在癌症的治疗中受到了广泛地关注，有些药物已经在临床应用。地锦草(Euphorbia Humifusa Willd，EHW)是一种传统中草药，含有多种生物活性成分，具有明显的抗炎和免疫调节作用。在前期的研究工作中，我们用地锦草水提物作用于宫颈癌小鼠模型，发现小鼠肿瘤的生长受到明显抑制，免疫功能得到明显加强。然而，有关地锦草中主要的生物活性物质黄酮醇（Flavonol），尤其对宫颈癌的作用及机理在国际上还不清楚。因此，本研究通过进一步提取地锦草，分离出其活性成分黄酮醇，通过体内、体外试验，较系统地研究了地锦草黄酮醇（EHWF）对宫颈癌的作用及其抑癌机理。本试验通过有机溶剂结合柱层析方法从地锦草中分离黄酮醇，得到棕色粉末，得率为1.41%，其含量为0.14mg/g，经特性分析为黄酮醇。在动物试验中，首先建立U14宫颈癌移植瘤小鼠模型，随机分为4组，每组10只，分别设为EHWF低剂量组(100mg/kg)、EHWF高剂量组(200mg/kg)、阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组。应用H.E.法、免疫组织化学法、酶联免疫吸附试验、流式细胞技术、RT-PCR以及Western blot方法等，对EHWF可能对宫颈癌生长抑制作用及机制、肿瘤细胞分裂周期调控影响、诱导肿瘤细胞凋亡以及机体内免疫系统调节等方面进行系统地研究。获得如下结果：不同剂量EHWF连续灌胃14d后，小鼠肿瘤组织的生长受到明显的抑制，生命体征得到明显的改善。EHWF低、高剂量均能明显地抑制小鼠肿瘤的生长(p<0.05)，肿瘤抑制率分别为40.17%和55.06%。同时肿瘤组织中突变型p53、Bcl-2、CerbB-2和Ki-67基因表达的阳性细胞百分率明显下降(p<0.05)。同时发现EHWF处理后的小鼠内脏器官肝脏、肾脏组织从外部形态到内部组织结构均未见改变。通过分析肿瘤细胞分裂周期，发现EHWF能阻滞肿瘤细胞分裂停留在G0/G1期(p<0.01)，并出现Sub-G1期凋亡峰，凋亡细胞的比例达到20.1%(EHWF高剂量组)，揭示EHWF一方面可通过阻滞细胞周期发挥抗肿瘤作用。小鼠肿瘤组织细胞中基因Bax、Caspse-8、Caspse-3、Fas和FasL的表达明显增加(p<0.01)，而基因Bcl-2的表达均减少(p<0.01)。这表明EHWF对肿瘤细胞的作用可同时通过凋亡的细胞内线粒体途径和细胞外死亡受体途径引起caspase的级联活化来诱导细胞凋亡。经过EHWF处理后，肿瘤组织中p16蛋白的表达增加，而PKC和C-myc的表达在肿瘤细胞中开始下降(p<0.01)，证明基因p16、PKC和C-myc与肿瘤细胞的凋亡有关。EHWF高剂量组可以明显增强宫颈癌小鼠的胸腺和脾脏功能，胸腺指数和脾指数提高(p<0.05)。NK细胞的杀伤活性有明显的增强(p<0.01)，并能刺激小鼠脾细胞增殖(p<0.01)。外周血中CD4+T淋巴细胞的数目呈剂量依赖性增加(p<0.01)，使T淋巴细胞CD4+与CD8+的数量比值也发生改变。外周血中的IL-2和TNF-α水平升高(p<0.05)，从而增强细胞因子的抗肿瘤作用。人宫颈癌Hela细胞体外培养试验中，EHWF作用于Hela细胞48h后，IC50水平为212.46μg/mL。揭示EHWF可以明显的抑制Hela细胞的生长，细胞中caspase-8和caspase-3的活性也明显上升，电镜观察Hela细胞出现了典型的凋亡形态学特征。通过测定Hela细胞的分裂周期，EHWF能明显影响肿瘤细胞内DNA合成与复制，阻滞细胞周期G0/G1期，抑制细胞正常分裂，从而抑制细胞增殖，导致肿瘤细胞凋亡。Hela细胞的凋亡数经过流式检测，EHWF处理后高剂量组(400μg/mL)中肿瘤细胞凋亡率达到36.62%。经EHWF处理后的Hela细胞在琼脂糖凝胶中出现DNA“梯状”条带。Hela细胞周期阻滞在G0/G1期，同时出现代表Sub-G1期凋亡峰。EHWF处理后的Hela细胞中，Bcl-2、Bax、CyclinD1和p16基因表达的改变以及细胞中caspase-8和caspase-3活性的增加(p<0.01)，证明EHWF引起Hela细胞的凋亡可通过线粒体途径和死亡受体途径进行，同时也影响肿瘤细胞的分裂周期。本研究通过体内、外试验，采用SP法、电镜技术、ELISA法、MTT法、流式细胞术、RT-PCR法和Western blot印记杂交技术等对细胞因子、蛋白、超微结构和细胞凋亡等进行分析，较深入地研究了对EHWF的抗宫颈癌的作用及相关机理，为EHWF治疗宫颈癌提供了科学依据和理论基础。