目的:检测利用静电纺丝技术构建含BMP-2缓释微球的聚己内酯复合纳米纤维支架的材料表征及对BMP-2生长因子的双重缓释作用,进一步评价复合材料对MC3T3-E1细胞增殖、分化影响。方法:(1)采用去溶剂法和静电自组装技术制备负载BMP-2的壳聚糖纳米微球,选用SEM、TEM及纳米粒度仪检测纳米微球的形貌及粒径,采用ART-FTIR与CLSM检测微球的组成成分,用BMP-2 Elisa Kit试剂盒检测BMP-2蛋白微球的包封率及体外蛋白释放情况,ALP试剂盒检测释放BMP-2的生物活性。(2)采用静电纺丝技术制备含BMP-2纳米微球的聚己内酯复合纤维支架材料,用SEM、TEM观察复合支架材料的形貌,通过拉伸强度及接触角试验检测材料性能,用BMP-2 Elisa Kit试剂盒检测支架材料中BMP-2蛋白的缓释情况,CLSM观察细胞在支架材料的生长情况,CCK-8法检测细胞的增殖及材料的细胞毒性,ALP、RT-PCR法和茜素红法检测支架材料促进细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶、相关基因和矿化结节的形成情况。结果:(1)SEM与TEM结果显示BMP-2/Chi微球形貌为较规整的球形,分散较均匀,表面光滑,粒径均小于1μm。在BMP-2/Chi的红外光谱中观察到壳聚糖的特征峰,表明微球成功被壳聚糖包裹。CLSM、PDI及Zeta电位结果说明壳聚糖包被的BSA形成的微球较稳定,同时分布较均匀。三组的载药率相差无统计学意义。ELISA结果显示纳米微粒中的BMP-2可以持续释放长达168h,BMP-2/Chi纳米微粒的缓释曲线较平缓,可实现BMP-2的持续释放。ALP结果显示BMP-2/Chi纳米微球组释放的BMP-2具有较好的生物活性,高于空白对照组,与阳性对照组相比统计学无意义。(2)SEM与TEM镜下所示三组纳米纤维支架材料呈随机分布纵横交错的三维网状结构,其中含微球的支架有团聚现象且直径略增粗,纤维表面有球形突起,微球被包裹于PCL支架内。加入纳米微球的纤维组拉伸强度降低。接触角实验中含纳米微球纤维支架亲水性增加。ELISA结果显示PCL/BNPs组的生长因子持续释放达28天,释放量达90%以上。CLSM镜下观察PCL/BNPs组的细胞在支架上形态铺展较好,有明显伪足的伸出。CCK-8结果示PCL/BNPs组的表面粘附的细胞数量增加。茜素红实验结果示PCL/NPs组与PCL/BNPs组的矿化作用更明显,更多钙盐沉积,钙结节大小和数量明显增加。ALP及RT-PCR结果显示PCL/BNPs组的ALP表达量和相关成骨基因COL1、OPN、RUNX均高于其他组。结论:本实验成功制备出含BMP-2纳米缓释微球的聚己内酯复合纤维支架材料,其中BMP-2生长因子能够小剂量的持续释放,MC3T3-E1细胞可在材料表面生长、增殖和成骨分化,这可为骨组织工程的发展提供新的材料选择。