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基因治疗(gene therapy)是指将外源基因(RNA或pDNA)导入到特定细胞中,以纠正因基因异常或补偿因基因缺陷而引起的各种异常,发挥治疗疾病的作用。目前来看,基因治疗技术在临床上还不够成熟,尚未能够应用于临床。外源基因片段不能主动进入细胞,需要载体的辅助才能进入细胞发挥作用,基因治疗应用于临床面临的一个最大障碍就是缺乏合适的基因载体(gene vector),高效和安全是基因载体的两项基本要求。因此开发新型基因载体具有非常重要的意义。本课题基于细胞穿透肽跨膜转运的原理,结合相关研究报道,设计了一种可降解多肽基因载体SHRss,该载体由硬脂酰化的含精氨酸、组氨酸、半胱氨酸多肽经二硫键桥连而成。体内外评价结果表明,载体具有较高的siRNA递送效率,同时保持了较低的细胞毒性。本课题的第一部分利用多肽固相合成法合成了多肽H3CR5C,并以同样的方法将硬脂酰基团连接到多肽上得到stearyl-H3CR5C,利用制备高效液相对其进行了纯化,HPLC法检测多肽和硬脂酰多肽的纯度在95%以上,HPLC-MS对多肽和硬脂酰多肽进行了鉴定。利用低浓度过氧化氢氧化法,将硬脂酰多肽中的巯基氧化成二硫键将其桥连起来得到SHRss,并用半胱氨酸控制桥连程度,H-NMR和GPC结果表明SHRss成功合成。本课题的第二部分对可降解多肽基因载体SHRss进行了体外评价。SHRss/siRNA纳米复合物在N/P=10时的粒径最小,粒径在150-300nm之间,电位在25-40mV之间,透射电镜观察到的纳米复合物近似球形,结构完整。SHRss2在N/P=5可以完全包裹住siRNA,并增加siRNA在血清中的稳定性。Luc-Hela细胞对SHRss/siRNA纳米复合物具有有非常高的细胞摄取。SHRss/si RNA纳米复合物在Luc-Hela细胞和mCherry-HEK293细胞中均表现出较高的siRNA递送效率。入胞机制研究结果表明,SHRss/siRNA纳米复合物的入胞途径主要为网格蛋白介导的内吞和质膜微囊介导的内吞。激光共聚焦显微镜观察发现,SHRss/Cy3-siRNA纳米复合物在入胞后可以成功的从内涵体逃逸,均匀的分布于细胞质。SHRss的细胞毒性小于Lipofectamine2000和PEI 25kDa,具有良好的生物相容性,二硫键的引入没有明显增加载体的毒性。本课题的第三部分对四种可降解多肽基因载体在体外评价中表现最佳的SHRss2进行了荷瘤裸鼠递送siRNA的体内研究。结果表明SHRss2/si RNA纳米复合物在尾静脉注射后可以较多的累积在荷瘤裸鼠的肿瘤组织中。SHRss2/si RNA纳米复合物对肿瘤组织中相关基因的表达有比较强干扰作用。