鸡马立克氏病(Marek’s disease, MD)由疱疹病毒科的马立克氏病病毒引起,1907年Josef Marek首次报道,主要引起各种脏器、皮肤的淋巴单核细胞浸润,通常于10-12周龄发病,可造成严重的经济损失。本研究以琼脂扩散试验,间接免疫荧光、病毒分离鉴定等方法,结合病理切片结果,在排除REV和ALV感染的基础上,对250日龄已免疫马立克疫苗肉种鸡鸡群中的肿瘤病原进行了鉴定。同时本研究参考OIE官方公布的MDV琼扩抗原制备方法,经改进制备出MDV标准抗原、标准血清,为MDV的诊断防治以及诊断试剂的标定提供了有效的方法和材料。1.肉种鸡产蛋高峰期马立克氏病的鉴定鸡马立克氏病通常于10-12周龄发病,由马立克氏病病毒引起。本研究以琼脂扩散试验,间接免疫荧光试验、病毒分离鉴定等方法,结合病理切片结果,在排除REV和ALV感染的基础上,诊断出250日龄已免疫马立克病疫苗肉种鸡鸡群的马立克氏病,并且成功分离到一株马立克氏病病毒,命名为MDV-AH1410。对其meq和gB基因进行PCR检测和序列分析,结果显示分离株与MDV Ⅰ型强毒及超强毒株的同源性为99.3%～100%,具有强毒特征。研究表明,鸡马立克氏病病毒不仅毒性在逐渐增强,而且鸡群发病的时间段也在延伸。2.马立克氏病病毒标准抗原、标准血清的研制选取MDV国际标准毒株RB1B作为候选毒株,用有限稀释法纯化病毒,将纯化好的病毒通过PCR的方法进行了纯异性分析,参考OIE公布的MDV琼扩抗原的制备方法经改进研制出MDV琼扩标准抗原,对其进行特异性分析以及琼扩效价测定。结果表明纯化的MDV-RBIB病毒无CAV、ALV、REV、EDS-76V、GPV、IBV、ILTV、IBDV等外源病毒,制得的琼扩抗原只与MDV阳性血清反应,与其他相关血清没有交叉反应,琼扩抗原效价为1：4。用1日龄SPF鸡腹腔注射MDV-RBIB毒株2000PFU/羽,每周采血血分离血清进行抗体检测,待琼扩试验阳性后无菌采血,通过间接免疫荧光和血凝抑制等方法进行纯异性分析,同时检测其荧光效价和琼扩效价。间接免疫荧光试验结果显示该制得的抗MDV血清不与ALV、GPV、REV、IBV、IBDV、NDV、AIV、EDS-76V等外源病毒反应,只与MDV反应,荧光效价为1：1600,琼扩抗体效价为1：4。制备的琼扩抗原加入1%的BSA,制备的多抗血清加入0.01%硫柳汞,分别冻干分装。按照中国兽药典进行无菌检验、支原体检验合格；检查分装差异系数CV值、物理性状、稳定性、均一性、保质期等均符合要求,最后获得了高质量的MDV标准抗原和标准血清,为MDV的诊断防治以及诊断试剂的标定提供了有效的方法和材料。