A型口蹄疫结构蛋白VP1可溶性表达及O型口蹄疫结构蛋白的融合表达

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口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是一种由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的具有高度传播性的跨界传染病,主要侵袭感染偶蹄目动物,致使其产生急性高热等症状。该病感染能力极强,传播途径多且范围广,在多个国家和地区发生过爆发流行,极其严重的阻碍了当地畜牧业发展,被认为是对农业构成最大经济威胁的病毒性疾病。极快的复制速度,极端的可传播性,广泛的易感动物和抗原多样性使得FMDV成为难以根除的病原体。  目前口蹄疫病毒被发现以7种血清型存在,各血清型之间无交叉免疫反应。现如今,A型、O型和Asia1型为中国主要流行的口蹄疫血清型。从2013年初开始,猪的A型口蹄疫开始在中国境内发生,直到2013年7月,中国向OIE报告十余次关于A型口蹄疫的疫情,这些疫情给当地畜牧业甚至当地经济带来了巨大的损失。在过去的70年中,灭活病毒疫苗的使用在疾病控制中发挥了关键作用。然而,环境的快速变化,日益增加的贸易间往来,人口数量的急剧增长,日渐频繁的国际旅行和大量的移民数量等因素导致疾病复发。所以需要在新技术的支持下,研发出新型疫苗,如DNA疫苗、VLPs疫苗等,作为疾病控制和根除的可能改进替代方案。  为获得具有活性的A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1蛋白,构建重组质粒pET-28a-MM-VP1,之后在E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达,SDS-PAGE显示,18℃为最适诱导温度,但重组蛋白以包涵体形式高效表达;为提高VP1蛋白可溶性表达量,将该重组质粒与分子伴侣质粒pTF16共转入E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达。结果表明,TF16有效提高了A-VP1重组蛋白的可溶性表达量,诱导最佳条件为18℃、0.1mmol/mLIPTG、2mg/ml阿拉伯糖、诱导时间20h。Western-Blot表明,得到的重组蛋白能够被阳性血清识别,反应原性良好。ELISA检测结果显示重组A-VP1蛋白具有良好的免疫原性,可用来研发口蹄疫相关的诊断试剂盒和新型基因工程疫苗。  为获得含有O型FMDV VP0、VP3、VP1的SUMO融合蛋白,利用pE-SUMO载体构建重组质粒pE-VP0-VP3-VP1,之后在E.coliBL21(DE3)中进行诱导,同时对诱导温度进行了优化。SDS-PAGE显示,最佳诱导温度为30℃,目的蛋白高效表达。Western-Blot结果表明,重组蛋白能够与His单抗特异性结合。获得该融合蛋白,可以为后续生产病毒样颗粒疫苗奠定基础。
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