【摘 要】
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鸭疫里默氏杆菌病是由鸭疫里默氏杆菌(Riemrella anatipestifer,RA)引起的一种主要侵害雏鸭、雏火鸡、鹅等多种禽类的急性或慢性、败血性、接触性传染病。感染鸭发病率高达90%、
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鸭疫里默氏杆菌病是由鸭疫里默氏杆菌(Riemrella anatipestifer,RA)引起的一种主要侵害雏鸭、雏火鸡、鹅等多种禽类的急性或慢性、败血性、接触性传染病。感染鸭发病率高达90%、死亡率高达75%,对世界养鸭业造成重大经济损失。RA属于拟杆菌门,黄杆菌属,无鞭毛和菌毛,而拟杆菌门有多种菌都存在滑行运动的现象。基因分析发现RA同样存在着滑行运动基因,同时还存在一整套的新型分泌系统即Ⅸ型分泌系统(the typeⅨsecretion system,T9SS)基因,该系统在拟杆菌门中普遍存在且高度保守。在前期研究中用转座子随机突变技术筛选到一株Yb2AS87_RS08465基因突变株,发现其毒力显著减弱,但具体的机制并不清楚。基因比对分析发现AS87_RS08465编码细菌滑行运动和Ⅸ型分泌系统核心组分蛋白GldM。 通过Western blot鉴定到该蛋白位于RA的细胞膜上。琼脂糖凝胶扩散试验证实了野生株Yb2存在着滑行运动,而突变株的滑行运动能力丧失。进一步的研究表明突变株RA2281(又称Yb2ΔgldM)的黏附和入侵细胞的能力显著降低,此外,突变株Yb2AgldM感染雏鸭的血液载菌量显著低于相同剂量野生株感染雏鸭的载菌量,表明AS87RS08465基因对RA感染雏鸭的致病性至关重要。经转录组测序发现,突变株Yb2AgldM有15个基因上调表达,其中有6个上调表达倍数在2倍以上、下调表达基因15个,其中有5个下调2倍以上,且部分基因也是Ⅸ型分泌系统的组分,提示这些成分之间存在着功能上的联系。本研究表明GldM蛋白与RA滑行运动有关,且对RA感染鸭的致病性有着关键作用。 提取野生株Yb2、突变株Yb2ΔgldM和回复株cYb2AgldM的分泌蛋白,SDS-PAGE分析发现突变株Yb2ΔgldM在分泌蛋白的丰度和含量上较Yb2和回复株cYb2ΔgldM有很大的区别,Yb2ΔgldM分泌蛋白的酶活试验也证实其酶降解能力显著降低,表明突变株缺失了分泌某些关键酶分子的能力。质谱分析结果显示Yb2ΔgldM的分泌蛋白与Yb2相比,具有显著性的差异,这些差异蛋白有9个含有特异性CTD结构,是Ⅸ型分泌系统的分泌底物。基因功能注释显示这9个蛋白很多都是具有催化活性的酶类,可能是RA重要的潜在毒力因子。本研究证明了GldM蛋白与RA的滑行运动、Ⅸ型分泌系统及蛋白分泌有关。
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