砂海星主要活性物质的制备及酸性粘多糖的活性研究

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砂海星(Luidia quinaria Von Martens),属棘皮动物门(Echinodermata)海星纲(Asteroidea),约占山东沿海海星资源总数的24%,主要分布在渤海中部和烟威渔场近海岸水域等盐度较高的海域。本文通过对砂海星酸性粘多糖及其它活性成分的制备和活性研究,可以为今后开发利用此类生物资源打下前期的基础,为砂海星资源的开发利用提供依据。(1)酸性粘多糖的制备:利用碱提法从黄海产砂海星中提取酸性粘多糖,粗品中糖和蛋白含量分别为29.5%和65.7%;Sevag法脱蛋白后,糖含量57.1%,蛋白含量13.8%;二次酶解后,糖和蛋白含量分别为63.2%和7.0%;提取物中含有硫酸基:25%的组分用离子交换层析(DE-52)和葡聚糖凝胶(G-75)进行分离、纯化,至少含有三个组分;用葡聚糖凝胶(G-100)对其分子量进行测定,其平均分子量约为12kD;琼脂糖凝胶电泳结果表明,该糖带负电。(2)多不饱和脂肪酸的提取:采用溶剂萃取和硅胶柱层析相结合的方法,从砂海星中提取脂肪并精制,其产率为1.18%。将精制脂肪进行气相色谱分析,结果表明,砂海星中含有丰富的不饱和脂肪酸,其种类共计约有24种,其中,二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)含量丰富。利用硅胶柱层析可以实现EPA和DHA的富集。经硅胶柱后,石油醚部分多不饱和脂肪酸的含量为57.564%,其中,EPA和DHA分别为46.015%和3.934%;乙酸乙酯部分多不饱和脂肪酸含量为54.948%,其中EPA和DHA分别为42.718%和3.705%。(3)分离纯化砂海星皂苷单体:采用85%乙醇水溶液反复提取的经典提取法,经石油醚脱脂、水饱和正丁醇萃取、丙酮沉淀从黄海产砂海星中制取海星总皂苷,总皂苷经大孔吸附树脂层析,葡聚糖凝胶LH-20层析等方法分离纯化得到海星皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,再经反复葡聚糖凝胶柱层析得到精制海星皂苷Ⅰ1、Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅲ1、Ⅲ2、Ⅲ3,高效液相色谱法鉴定精制结果峰Ⅰ1、峰Ⅱ2呈现单峰。经泡沫实验,颜色反应实验,沉淀反应实验表明提取物为甾体皂苷。(4)酸性粘多糖的活性实验:以昆明种小鼠为实验动物,研究了砂海星氨基多糖(GAG)降血脂作用.结果表明,GAG能显著降低高脂饮食小鼠的TG,TC,LDL-C,并能显著提高LDL水平,能有效抑制高脂饮食小鼠血脂的升高,将血脂的各项指标控制在正常范围内:利用实验中制备的酸性粘多糖粗制品采用MTT法进行体外抗肿瘤实验,结果表明1.0mg/ml实验组具有显著的抗肿瘤活性,24h内对HL-60细胞的抑制率达58.2%.总之,研究表明砂海星作为海洋生物中一个小的类群,含有丰富的营养成分和多种活性物质,具有一定的保健和药用价值。
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