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蝉拟青霉(Pfaecilomyces cicadae)作为一种在我国研究较早的昆虫病原真菌,其对鳞翅目、半翅目等农业害虫具有致病能力。然而该菌基础研究,尤其是致病机理知之甚少,在一定程度上限制了该菌在害虫生物防治上的应用。鉴于此,本研究对蝉拟青霉基因组进行测序,筛选毒力相关基因,鉴定了 18个蝉拟青霉几丁质酶基因,并对这些基因的分类、结构域、表达模式进行了分析。本研究结果对进一步阐述蝉拟青霉的致病机制、提高其防治效果和应用潜力具有重要的理论研究意义和实际应用价值。主要研究结果如下:(1)蝉拟青霉菌株ZJ1611的基因组G+C含量为53.11%,基因组大小约为33.8 Mb,共包括11106个基因。与其他昆虫病原真菌基因组比较显示蝉拟青霉的基因组大小与蛹虫草(Cordyceps militaris)和球孢白僵菌(Beauveria bassiana)基因组相似,但小于绿僵菌属病原真菌(Metarhizium robertsii、M.anisopliae和M.acridum)基因组。(2)从蝉拟青霉基因组中筛选出了41类蛋白家族共464个毒力相关基因。对挑选出的不同侵染阶段的蝉拟青霉16个毒力基因序列分析表明,分子量范围为10.58-224.95 KDa,其中PChyd最小,PCacy最大。除了PCmpl1、PCabc、PCmfs、PCpta 4个蛋白预测的pI>7外,其余pI均小于7。基因表达模式结果显示,PCmpl1、PCcyp450、PCpr1b、PCmsn、PCabc、PCmfs和PCacy在AP中相对表达水平显著高于其他各样品;PCdtx和PCchi分别在PDA和BS中相对表达水平显著高于其他样品;除PCmsn、PCabc、PCdtx、PCmfs和PCacy外,其余基因基本与已报道的白僵菌或绿僵菌相关毒力基因所描述的功能较为相似。(3)从蝉拟青霉基因组中鉴定出18个GH18几丁质酶基因。这些基因具有有关保守结构域,包括DxxDxDxE、S/AxGG、CBM1、CBM18和CBM50。18个几丁质酶分为sgA、sgB、sgC三个组,分别包含7、8、3个几丁质酶基因。内含子分析显示大多数基因含有内含子。除PCchiA1外,大多数几丁质酶的pI小于7。表达模式分析显示,PCchiA4、PCchiA6、PCchiB1、PCchiB4 4个基因分别在9个不同的样品中呈现出高水平表达。同时sgA亚组几丁质酶基因相较于其他两个几丁质酶亚组呈现出了更高的表达水平。几丁质酶基因在含有几丁质培养基的诱导条件中都普遍表达。此外,和其他几丁质酶基因相比PCchiB1几乎在所有样品中都呈现出了高水平表达。(4)完成了蝉拟青霉对潮霉素B(HPH)和草甘膦(PMG)的敏感性实验。以sgA基因为研究对象利用原生质体转化方法进行了蝉拟青霉基因敲除体系的构建,并从阳性转化子中扩增出1384bp的HPH片段。初步建立了蝉拟青霉基因的敲除体系。