【摘 要】
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第一章钙调磷酸酶在缺氧/复氧和肾上腺素能受体介导的心肌细胞凋亡中的作用目的:研究钙调磷酸酶(Calcineurin,CaN)在缺氧/复氧和肾上腺素能受体介导的心肌细胞凋亡中的作用。
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第一章钙调磷酸酶在缺氧/复氧和肾上腺素能受体介导的心肌细胞凋亡中的作用目的:研究钙调磷酸酶(Calcineurin,CaN)在缺氧/复氧和肾上腺素能受体介导的心肌细胞凋亡中的作用。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,观察单纯缺氧24h/复氧4h(H/R)及异丙肾上腺素(Iso 10μmol/L)+缺氧24h/复氧4h(Iso+H/R)共同作用下心肌细胞凋亡率的变化,以及相应的钙调磷酸酶的表达。观察给予CaN抑制剂环孢菌素A(CsA)0.5μmol/L干预后心肌细胞凋亡率和CaN的表达变化。用DNA Ladder法及流式细胞仪DNA含量测定法(PI标记)检测心肌细胞凋亡,RT-PCR法检测CaN mRNA的水平。结果:Iso(10μmol/L)可以增加缺氧24h /复氧4h诱导的心肌细胞凋亡率(10.763±1.554 vs 8.737±1.120, P﹤0.05),同时CaN mRNA水平随之增加(0.689±0.035 vs 0.464±0.023, P﹤0.01),CaN抑制剂环孢菌素A(CsA)可降低Iso+H/R所诱导心肌细胞凋亡率(6.270±0.306 vs 10.763±1.554, P﹤0.01)。结论:β-肾上腺素能受体激动剂可促进H/R所诱导心肌细胞凋亡,并伴随有CaN表达的增加;CaN抑制剂CsA可抑制二者共同作用所诱导心肌细胞凋亡,说明CaN参与了心肌细胞凋亡,有促细胞凋亡的作用。第二章钙调磷酸酶Aα基因过表达在缺氧/复氧和肾上腺素能受体介导的心肌凋亡中的作用及机制研究目的:研究腺病毒介导的钙调磷酸酶Aα基因(AdCnAα)过表达对缺氧/复氧和肾上腺素能受体介导的心肌凋亡中的作用及p38MAPK的变化。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,分别给予Iso (10μmol/L) +缺氧24h /复氧4h(Iso+H/R)及感染重组腺病毒(AdCnAα)+Iso+H/R处理,观察AdCnAα对Iso+H/R诱导的心肌细胞凋亡的影响。用DNA Ladder法及流式细胞仪DNA含量测定法(PI标记)检测心肌细胞凋亡,用RT-PCR法和Western-blot法分别检测CaN mRNA及蛋白表达。用Western-blot法检测腺病毒介导的钙调磷酸酶Aα基因(AdCnAα)过表达后p-38、p-p38MAPK的变化。结果:心肌细胞感染CnAα重组腺病毒组(AdCnAα+Iso+H/R)的细胞凋亡率比未感染组(Iso+H/R)明显增加(14.247±0.525 vs 10.763±1.554, P﹤0.01),且均高于正常对照组;
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