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随着人类生活水平的显著提高,肥胖已成为当今世界影响最广泛的慢性疾病之一。肥胖最早出现于欧美等发达国家,随着全球经济的快速发展,发展中国家也相继出现肥胖问题,并呈现迅猛上升的趋势。据统计,截止2014年,全球肥胖人口数已达6亿,患病率高达13%。我国同年净肥胖人口数高达9500万,已超越美国。与肥胖相关的疾病有很多,如高血压、冠心病、中风、癌症等。同时肥胖所带来的社会负担也是不可估量的,至2012年,中国因死亡所致的间接经济损失中肥胖相关疾病所占比例高达67.1%。严峻的肥胖蔓延趋势和其所带来的严重后果将成为未来我们难以承受的社会负担,肥胖的预防和治疗已经成为全世界共同面临的难题。因此,研制安全有效的减肥保健品具有重要意义。胰脂肪酶(pancreatic lipase,PL)是肠道中水解膳食脂肪最主要的酶,人体摄入脂肪的50-70%可被其水解,若将其阻断便可有效减少机体对脂肪的吸收,从而达到预防和减轻肥胖的目的。由于天然产物具有结构多样化、来源广、副作用小等特点,天然产物来源的PL抑制剂越来越受到人们的关注。课题组前期研究发现,连翘叶中含有多种PL抑制剂,这为本课题的开展提供了科学依据。本论文以连翘(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)叶为研究对象,首先对不同连翘叶样品(包括不同月份连翘叶、不同炮制方法处理的连翘叶以及大孔树脂分离后不同极性段)的抑酶活性进行测定,并分析各样品中所含成分种类和含量,推测其中主要的药效成分,为连翘叶减肥保健品开发提供理论依据。其次,以抑酶活性和得率为综合指标,对连翘叶中抑酶活性组分进行水提醇沉工艺优化。最后,将所得产物用于SD雄性大鼠体内减肥活性评价,通过大鼠摄食量、体重、Lee’s指数、脂肪系数评价其减肥功能,同时,测定给药结束后大鼠血脂中各指标含量,评价其辅助降血脂功能。所得结论如下:1.不同月份连翘叶抑制PL活性研究。结果表明:4~10月份连翘叶提取物中,4、5和6月份抑酶活性较高,粗提物浓度为1000μg/mL时抑制率分别为45.06%、38.97%和46.64%,随后抑酶活性呈下降趋势,9月最低为25.48%,在10月又略有回升。通过HPLC共鉴定出连翘叶中8种成分,分别为绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、芦丁、橙皮苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、连翘苷和连翘脂素,其中连翘酯苷A和连翘苷含量最高,芦丁次之,其余成分含量较低。4~6月连翘叶中,除连翘脂素外,其余成分含量均相对较高,而5月份连翘叶中含连翘苷最多,后续研究表明连翘苷对PL有促进作用,故5月份连翘叶抑酶活性略低。2.不同连翘叶炮制品及大孔树脂不同极性段抑制PL活性研究。结果表明:各炮制方法对连翘叶抑制PL活性影响从大到小依次为:烘干>煮后阴干>蒸后阴干>自然阴干。各炮制品都包含上述8种成分。炮制方法对连翘苷和连翘脂素含量影响最大。烘干连翘叶中连翘苷含量明显低于其他炮制品,一是由于烘干时连翘叶中植物酶完全失活,抑制PL活性成分损失较少,二是由于烘干时连翘苷在空气中极易发生反应,致使其含量显著下降,对PL的促进作用显著降低,两因素共同导致连翘叶烘干炮制品抑制PL活性最强。通过对烘干炮制品提取物进行大孔树脂分离以获得不同极性段,发现20%和40%乙醇洗脱部位抑酶活性最高。七月份连翘叶抑制率为32.79%,经最佳炮制方法炮制和大孔树脂分离后提高到61.30%。3.连翘叶各成分抑制PL活性研究。结果表明:抑制PL活性顺序为山奈酚-3-O-芸香糖苷>橙皮苷>芦丁>咖啡酸>连翘酯苷A,连翘苷对PL有促进作用,连翘脂素对PL几乎无抑制作用。通过对不同月份、不同炮制方法、不同极性段洗脱样品进行谱效相关性分析,推测连翘叶中起主要抑制PL活性成分可能为连翘酯苷A和芦丁。山奈酚-3-O-芸香糖苷和橙皮苷虽抑酶活性很高,但其在连翘叶中含量较低,两者含量相加不足1%。咖啡酸在连翘叶中含量更低,且抑酶活性较低,所以对样品抑酶活性影响较小。4.以抑酶活性和得率为综合指标对连翘叶水提醇沉工艺进行优化。经单因素考察和正交实验,得最佳水提条件为:料液比1:10,提取两次,2 h/次。得率为43.45%,1000μg/mL水提物对PL抑制率达到37.57%。最佳醇沉条件为:提取液浓缩至1:1,70%乙醇终浓度醇沉,收集滤液、浓缩干燥即得最终产物。水提醇沉得率为34.16%,1000μg/mL时对PL抑制率达到43.84%。对该工艺路线的三批平行样品进行重复性检验,其得率和各成分的RSD值均小于5%,表明该工艺路线重现性好。5.SD雄性大鼠预防肥胖模型实验。结果表明:连翘叶水提物(ST)和水提醇沉物(SC)高剂量组对降低大鼠体重、降低Lee’s指数都有显著作用(P<0.05),ST高剂量组对减少体内脂肪积累有极显著作用(P<0.01),而SC高剂量组具有显著作用(P<0.05),证明两者都具有减肥作用。血脂含量检测结果证明:两者对降低大鼠血清中甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白含量都起极显著作用(P.<0.01),证明二者也都具有降血脂作用。由于ST及SC两者减肥和降血脂作用药效相近,考虑实际生产中工艺简化及生产效益,连翘叶减肥保健品以直接水提更为可行。