背景和目的 随着社会的发展,生活节奏的加快,各种应激因素增多,心理社会因素越来越成为现代社会中的重要的应激原。应激会引起机体神经内分泌反应,出现一系列全身变化,突出表现一下四个方面,物质代谢的变化,心血冠功能的增强,消化功能的变化,免疫功能的变化。本课题建立不同的心理应激的大鼠模型,用免疫荧光技术对大鼠胃壁细胞质子泵的进行观察及其用放射免疫的方法对血清白细胞介素 2 水平进行测定,探讨心理应激对大鼠消化系统和免疫系统的影响。第一部分 免疫荧光方法观察心理应激时大鼠胃壁细胞形态的改变目的:应用免疫荧光方法观察不同心理应激状态下大鼠胃壁细胞形态的改变及其与泌酸功能的关系 。材料与方法: 本实验选用Sprague-Dwley(SD)雄性大鼠,制备噪声应激、光电不规则刺激应激、水浸束缚应激(WRS)模型;观察各组大鼠的胃粘膜损伤情况,评估胃粘膜损伤溃疡指数(UI);于光镜下观察胃粘膜组织病理学改变。采用 pH/mV 型 pH 计检测胃液pH值;用免疫荧光方法标记胃壁细胞H+,K+-ATP酶β亚单位或α亚单位及线粒体,在荧光显微镜及激光共聚焦扫描显微镜下观察壁细胞形态的变化并计算不同应激状态下不同形态壁细胞的数目。对胃液 pH 值与胃粘膜损伤指数(UI)和分泌相壁细胞之间的关系进行分析。 结果:1、胃粘膜形态学观察:对照组未见损伤性改变,光镜下粘膜结构完整。噪声应激组大鼠胃粘膜明显充血,表面有少量血痂,腺胃部散在多数点状或线状糜烂、出血,UI为10.5±1.29,明显高于对照组(p<0.01)。光镜下 6<WP=10>第二军医大学硕士学位论文 中文摘要粘膜表层上皮细胞受损明显,有坏死、脱落,局部腺体结构紊乱。光电不规则刺激应激组大鼠胃粘膜充血,表面有少量血痂,腺胃部散在点状及少量线状糜烂、出血,UI为10.03±0.33,明显高于对照组(p<0.01)。光镜下表层粘膜部分坏死,脱落。水浸束缚组大鼠胃粘膜表面附有大量血痂,腺胃部弥漫性点状或线状糜烂、出血及溃疡形成,UI 高达 37.25±2.22,明显高于对照组(p<0.01)。水浸束缚组与噪声心理应激组差别明显(p<0.01)。光镜下粘膜明显出血、坏死,大片状脱落,粘膜中断,溃疡形成,溃疡可深达粘膜肌层。2. 胃液 pH 值检测情况 :对照组大鼠胃液 pH 值为 2.59±0.21,噪声应激组胃液 pH 值为 2.22±0.05,与对照组比较有显著差异(p<0.05)。光电不规则刺激应激组 pH 值为 2.19±0.07,与对照组比较有显著差异(p<0.05)。水浸束缚组胃液 pH 值为 1.28±0.06,与对照组、噪声应激组 光电不规则刺激应激组比较差异均非常显著(p<0.01)。3.胃壁细胞数目的定量分析 :免疫荧光标记胃壁细胞后在荧光显微镜下其形态可分为网格型、颗粒型以及混合型三种,网格型细胞为具有泌酸活性的壁细胞。激光共聚焦扫描显微镜下网格型细胞胞浆中充满管状结构,而颗粒型细胞胞浆中充满了颗粒样结构。对照组网格型细胞数为42.5±3.70/100个壁细胞(下同),噪声应激组为55.5±3.42/,与对照组比较有显著差异(p<0.01)。光电不规则刺激应激组54.5±3.87/,与对照组比较有显著差异(p<0.01)。二者之间差异无显著性(p>0.05)。水浸束缚组为 62.0±3.56/。与对照组比较差异非常显著(p<0.01)。与噪声应激组 、光电不规则刺激应激组比较差异均显著(p<0.05)。4. 胃液pH值与胃粘膜损伤指数(UI)和分泌相壁细胞之间的关系 大鼠胃液 pH 值与胃 UI 呈负相关(r=-0.85,p<0.05),与分泌期壁细胞数呈负相关(r=-0.89,p<0.05)。 5、双重免疫荧光标记:对照组大鼠壁细胞可见线粒体与 H+,K+-ATP 酶分离,表明壁细胞处于静息状态。水浸束缚组应激大鼠可见线粒体随H+,K+-ATP酶分布,表明壁细胞处于分泌状态。 结论:1.噪声应激、光电不规则刺激应激、水浸束缚应激动物模型制作非常成功;心理应激可激活大鼠胃壁细胞,引起胃酸分泌增加。胃酸的分泌状态与壁细胞免疫荧光的改变相一致, 7<WP=11>第二军医大学硕士学位论文 中文摘要并与胃粘膜损伤程度有明显的相关性,提示胃酸在心理应激导致的溃疡的发生过程中具有重要的意义。2.可以用免疫荧光的方法对单个壁细胞的泌酸活性进行形态学观察。3.壁细胞双重免疫荧光标记结果从形态学上再次证明泌酸过程是一个耗能过程。第二部分 不同心理应激下大鼠血清白细胞介素2 水平的变化目的:探讨在不同应激方式中,白细胞介素 2 血清水平在应激中和应激后的变化。材料与方法: 本实验选用Sprague-Dwley(SD)雄性大鼠,制备噪声应激模型、单纯束缚应激模型和水浸-束缚应激(WRS)模型,应用放射免疫方法,对大鼠在接受应激1、2、4 小时后血清白细胞介素 2 的变化的情况进行分析比较。结果:1. 噪声应激组: 与对照组相比,应激开始后,1h组、2h组、4h组血清IL-2水平显著下降(p<0.05)。1h组和2h 组之间无显著的差别(p>0.05),但4h 组显著低于1h 和2h 组(p<0.05)2 单纯束缚组: 与对照组相比,应激开始后,1h 组、2h 组、4h 组血清 IL-2 水平显著下降(p<0.05)。但三组之间无显著的差别(p>0.05)3 水浸束缚组:与对照组相比,应激过程中 1h 组、2h 组、4h 组血清