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彭泽鲫(Carassiusauratusofpengze)原产于江西省彭泽县丁家湖、芳湖和太白湖等天然水域,上世纪80年代开始经人工选育而逐渐成为一个广受欢迎的鲫鱼养殖品系。最初江西省水产研究所认为彭泽鲫是二倍体(2n=100)两性生殖鱼类,但随后报道的彭泽鲫染色体数目均在150条以上,不同研究者对其倍性的看法也存在分歧。近年来笔者所在的实验室在对彭泽鲫的系统研究中,鉴定出存在于彭泽鲫天然种群内的两个雌核发育克隆,分别称为克隆H和克隆L(为准确期间,本文称之为H系和L系)。它们在体型和生长速度上存在明显差异,其中H系体较高、生长速度较快;L系体较低,生长速度较慢。同时,我们还在异精激发H系彭泽鲫的子一代中发现少数具有部分父本形态特征、生长速度明显快于正常异育彭泽鲫的个体。研究表明这些个体整合了部分或全套的父本染色体组,我们称之为复合系彭泽鲫(multiplepengzecruciancarp,简称复合系)。如何快速准确地鉴定这些不同的彭泽鲫品系是迫切需要解决的问题之一。
序列特异性扩增区域(SequencedCharacterizedAmplifiedRegions-SCAR)多由RAPD标记转换而来。方法是将理想的RAPD标记克隆并进行末端测序,然后在原RAPD所用的10bp引物上增加合成上述末端序列得到一对引物,对基因组DNA再扩增分析。目的是将RAPD标记转化为更稳定的SCAR标记。
本论文对彭泽鲫的RAPD反应条件进行了优化,建立了适用于彭泽鲫的标准化RAPD反应体系:反应总体积为10μL,其中含5μl0.1UTaqPolymerase/μl,500μMdNTPeach,20mMTris-HCl(PH8.3),100mMKCl,3mMMgCl2;1μL(约10ng)引物;1μL10~15ng/μL的模板DNA;3μL灭菌水。94℃预变性7min;94℃变性40sec,38℃退火1min,72℃延伸L5min,共40个循环;最后在72℃延伸8min。多批次的实验扩增证明该反应体系的稳定性好,重复性强。
本研究寻找到了复合系、H系和L系的特异性RAPD标记,通过对特异RAPD片断的回收,克隆,测序,设计了特异PCR引物,成功获得复合系、H系和L系的转化的SCAR标记。这为快速准确地鉴定彭泽鲫的不同品系提供了一个有效的分子工具。从而为进一步开展两性型天然雌核发育鲫鱼的理论研究建立了一个良好的平台。同时为开展彭泽鲫的品系选育和遗传育种研究提供了有效的辅助选育手段。