基于熵驱动分子开关和信号放大技术均相检测单核苷酸多态性的研究

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2003年,人类基因组计划完成,鉴于单核苷酸多态性影响人类对疾病的响应,越来越多的研究人员将更多的注意力放到检测识别单核苷酸多态性的研究上。个性化诊断就变得越来越受到人们的重视,因此快速检测与疾病和易患病体制相关的单核苷酸多态性就变得越来越重要。均相检测使得单核苷酸多态性实时检测成为可能,并能够减少污染并省略复杂的清洗步骤。本论文提出一种可以在均相溶液中快速灵敏的检测SNP的方法,它基于熵驱动分子开关和恒温聚合酶链取代反应而构建,并且不需要额外加入引物。此方法具有很高的灵敏度,荧光强度变化值与突变DNA浓度的对数在4.0×10–10至2.0×10–8 M范围内呈现良好的线性关系,检测限可以达到1.85×10-10 M,可以直接用于检测基因组DNA。同时,由于T4 DNA连接酶的高保真性,本方法具有很高的选择性,在10 nM的基因组DNA中含有的0.3 nM的突变DNA也可以被特异性的检测到,可以检测野生型DNA里的痕量突变目标。该方法通过目标与分子开关杂交来控制分子开关的构象改变,使分子开关的3’末端引发聚合酶反应,而不需要另外加入引物。此方法的成功可以对点突变进行高效、均相、灵敏检测,因此其可能在科学研究、临床诊断等诸多方面发挥重要应用。
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