【摘 要】
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目的:建立哮喘大鼠气道重塑模型,确定哮喘大鼠气道平滑肌重塑,对哮喘大鼠给予ATP敏感性钾通道开放剂—尼可地尔治疗,并检测相关指标。本研究主要探讨开放ATP敏感性钾通道导致
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目的:建立哮喘大鼠气道重塑模型,确定哮喘大鼠气道平滑肌重塑,对哮喘大鼠给予ATP敏感性钾通道开放剂—尼可地尔治疗,并检测相关指标。本研究主要探讨开放ATP敏感性钾通道导致逆转哮喘大鼠的气道平滑肌重塑的分子机制,从而为治疗哮喘提供新的途径。 方法:(1)32只清洁级的雄性SD大鼠,随机分为4组,分别为正常组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松治疗组(C组)和尼可地尔治疗组(D组)。本实验动物模型采用5点注射致敏和雾化吸入卵白蛋白(OVA)激发的方法建立哮喘大鼠模型。通过大鼠外周血中性粒细胞计数,肺泡灌洗液中白细胞分类计数,以及肺组织 HE染色确定大鼠哮喘模型制备成功。(2)将各组大鼠处死后取外周血,气管,以及肺组织分别进行白细胞计数,气道张力检测,HE染色检测开放ATP敏感性钾通道后,对哮喘大鼠气道重塑的治疗作用。(3)取各组大鼠肺组织,TRIzol法提取RNA并通过半定量PCR检测TLR-4以及Bax/Bcl-2的RNA表达水平;Western Blot检测NF-κBp65、T-bet/GATA-3以及Bax/Bcl-2蛋白表达。 结果:(1)外周血白细胞计数和肺泡灌洗液白细胞计数的结果显示,哮喘组大鼠嗜酸性粒细胞明显增多;肺组织HE染色结果显示哮喘组大鼠的支气管气道平滑肌厚度明显增加、支气管粘膜皱襞增多、管腔内出现大量的嗜酸性粒细胞浸润、肺泡隔增厚。表明气道重塑哮喘大鼠模型建立成功。(2)尼可地尔治疗组和地塞米松治疗组中,与哮喘组比较,外周血和肺泡灌洗液的嗜酸性粒细胞数显著降低,有显著性差异;气管螺旋条对氯化乙酰胆碱的收缩反应明显降低;气道平滑肌厚度明显减小,粘膜的结构较为完整,嗜酸性粒细胞浸润减少,并无明显的气道重塑表现。(3)RT-PCR的结果显示,尼可地尔治疗组与哮喘组比较,TLR-4的RNA水平明显降低,与凋亡相关的基因Bax表达增加,而Bcl-2表达降低;Western Blot结果表明炎性相关因子NF-κBp65的表达降低,免疫相关因子T-bet含量升高而GATA-3明显下降,凋亡相关的基因 Bax表达增加,Bcl-2表达降低。 结论:在本实验中,使用尼可地尔开放ATP敏感性钾通道治疗气道重塑的哮喘大鼠。众多结果表明:与哮喘组相比较,开放ATP敏感性钾通道能显著改善哮喘大鼠的症状,相关检测结果表明与重塑有关的指标、以及相关的因子均有所改善。其疗效与地塞米松组比较,不良反应较少,这为治疗哮喘提供了一个新的途径。
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