雌性大鼠骨髓干细胞离体从头合成雌二醇的研究

来源 :南昌大学医学院 南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Dean_NEU
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目的:研究雌性大鼠骨髓干细胞(female bone marrow stem cells, FBMSCs)在含10%胎牛血清的高糖DMEM离体培养条件下细胞形态的变化,检测能否分化为产生雌二醇(estradiol,E2)及表达芳香化酶(aromatase, P450arom)的性激素生成细胞,为卵巢早衰、老年人骨质疏松症等疾病的治疗提供新的可能途径。方法:全骨髓贴壁法分离成年雌性SD大鼠的骨髓干细胞,用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养增殖,传代至第3代,加或不加全反式视黄酸(all-trans retinoic acid, ATRA)诱导分化,分为对照组(不加ATRA)和ATRA组(加ATRA 10-5 mol/L),观察两组细胞的形态学变化;放射免疫法(radioimmunoassay, RIA)/酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测两组细胞培养液中E2、睾酮(testosterone, T)/雄烯二酮(androstenedione,ASD)的浓度;RT-PCR检测两组细胞中芳香化酶基因CYP19 mRNA的表达和FSHR mRNA的表达;免疫细胞化学检测两组细胞中芳香化酶蛋白的表达情况。结果:1.离体培养的第3代雌性大鼠骨髓干细胞,主要表现为大小均一、梭形的贴壁细胞。2. DMEM高糖培养基加胎牛血清培养第3代雌性大鼠骨髓干细胞,RT-PCR示对照组和ATRA组从培养第1天开始均表达合成雌二醇的关键酶芳香化酶CYP19 mRNA和颗粒细胞标志基因FSHR mRNA,免疫细胞化学示两组细胞从培养第2天到第4天都有芳香化酶蛋白的表达,阳性细胞呈簇状分布,形态呈多角形或梭形,细胞核呈卵圆形,染深蓝色。从培养1天开始在两组细胞培养液中都检测到较高水平的E2。3.对照组和ATRA组都能产生T和ASD,提示雌性大鼠骨髓干细胞在离体培养条件下能从头合成E2。结论:雌性大鼠骨髓干细胞在离体培养条件下能从头合成E2及表达芳香化酶,分化为性激素生成细胞。
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