目的通过研究龙柴降血方治疗BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPNs)的靶向性,为中医药治疗MPNs提供个体化治疗方案。通过研究龙柴降血方对MPNs患者凝血功能的影响,为中医药改善MPNs患者凝血状态提供支持。方法临床研究一采用前瞻性研究方法,将2019年5月至2019年12月就诊于中国中医科学院西苑医院的40例MPNs患者纳入研究。予龙柴降血方为主治疗6月,探索龙柴降血方治疗MPNs的临床疗效及基因靶向性。临床研究二采用前瞻性研究方法,将2019年5月至2019年12月就诊于中国中医科学院西苑医院的30例MPNs患者纳入研究。分为对照组17例(阿司匹林肠溶片+龙柴降血方)及观察组13例(龙柴降血方)。治疗6月,分析龙柴降血方对MPNs凝血功能的影响。结果11.总体突变结果1.1 MPNs基因突变种类、功能组及突变数目40例患者中,共检出突变基因18个。JAK2为最常见突变基因,突变率为67.5%(27/40)。JAK2在PV、ET、PMF突变率分别为80%、68.4%及33.3%。信号通路突变为最常见的突变功能组。患者突变数目从0-4个不等,双突变最常见。1.2 JAK2突变负荷单JAK2突变负荷为29.98%±23.14%,合并JAK2的双突变患者JAK2突变负荷为60.9%±22.67%,合并JAK2突变的三突变患者JAK2突变负荷为41.88%±29.27%。双突变患者的JAK2突变负荷显著高于单JAK2突变患者(P=0.0053)。2.基因突变与临床特征2.1基因突变与年龄以60岁为界限,≥60岁患者共测出31个基因突变,常见突变数目为双突变,其JAK2突变负荷为58.51%±24.41%。<60岁患者共检测到39个突变基因,最常见突变数目为单突变,其JAK2突变负荷为39.97%±28.27%。2.2基因突变与性别70个检出突变中,男性(16例)检出突变24个,女性(24例)检出突变56个。男性JAK2突变率显著高于女性(P<0.05),女性TET2突变率显著高于男性(P<0.05)。2.3基因突变与疾病亚型PV(15例)患者检出突变24个,ET(19例)患者检出突变32个,PMF(6例)患者检出突变14个。PV、ET均以信号通路突变为主,PV以双突变为主,ET以单突变为主。2.4基因突变与血栓事件11例患者既往发生血栓事件,占比27.5%(11/40),包括心梗患者3例及脑梗患者9例。11例血栓事件患者均发生基因突变,且均含信号通路突变。其中9例为双突变,3例为单突变。血栓事件患者JAK2突变负荷为55.11%±22.49%。3.临床疗效3.1患者整体有效率治疗后完全缓解12例,占比30%(12/40),部分缓解22例,占比55%(22/40),病情稳定2例,占比5%(2/40),治疗无反应4例,占比10%(4/40)。3.2临床疗效与基因突变完全缓解患者突变数目集中在双突变及单突变,部分缓解患者突变数目主要为双突变,其功能突变组主要为信号通路及甲基化基因。病情稳定患者为三突变,其功能突变组包括信号通路突变和染色质重塑。治疗无反应患者主要为四突变及三突变,其突变功能组主要为染色质重塑基因。四组不同临床疗效患者JAK2变负荷未见显著差异(P>0.05)。但完全缓解患者及部分缓解患者JAK2突变负荷居中(20%-60%),病情稳定患者JAK2突变负荷较高(>60%),治疗无反应患者JAK2突变负荷较低(<20%)。结果21.总体凝血状态MPNs患者总体处于高凝状态,PV、ET、PMF都与纤维蛋白原功能亢进有关,但PV还存在凝血因子活性增强,ET和PMF还存在血小板聚集功能亢进。2.凝血状态与血栓事件相关性MPNs 血栓事件与 APTT 延长相关(OR=15.1,95%CI:1.158-196.141)。3.龙柴降血方对MPNs患者凝血状态影响龙柴降血方治疗后,APTT可显著缩短(P<0.05),改善高凝状态。结论11.MPNs最常见的突变类型为JAK2突变,最常见的突变功能组为信号通路突变,最常见的突变数目为双突变,最常见的JAK2突变负荷为中等突变频率(20%-60%)。2.龙柴降血方治疗MPNs靶向基因可能为:突变功能组为信号通路及甲基化基因,以双突变及单突变为主,以及JAK2突变负荷居中(20%-60%)。结论21.MPNs患者存在高凝状态,主要与纤维蛋白原功能亢进有关,与凝血因子活性增强以及血小板聚集功能亢进也有相关性。2.APTT延长可能是反映MPNs患者血栓事件的敏感指标,龙柴降血方可通过缩短APTT至正常范围,达到改善患者凝血状态,发挥抗栓作用。