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神经肽FF是属于RFamide相关肽家族中的一种八肽,在多种生物过程中具有调节功能。本文克隆了小黄鱼(Larimichthys polyactis)神经肽FF相关基因(LpNPFF:Accession No.MT012894)及其两种受体(LpNPFFR1:Accession No.MT012894和LpNPFFR2:Accession No.MT12896)。序列分析结果显示小黄鱼神经肽FF相关基因cDNA全长835bp,开放阅读框(ORF)编码了127个氨基酸残基,包含一个21个氨基酸残基的信号肽和两个成熟的PQRFamide肽,预测其蛋白质相对分子量(MW)为29.8 kDa,等电点(pI)为5.90。LpNPFFR1和LpNPFFR2属于典型的G蛋白偶联受体家族,均具有7个跨膜区域,他们的ORF区域分别编码了427和444个氨基酸残基。多序列同源性比对与系统进化树分析结果显示小黄鱼神经肽FF及其两种受体基因皆与大黄鱼(Larimichthys crocea)的亲缘关系最近;RT-PCR和RT-qPCR结果显示,小黄鱼神经肽FF及其受体基因在性未成熟期(第Ⅱ期)的小黄鱼的脑和性腺中表达含量较高,其次是头肾和肾脏,在心脏和脾脏中也有表达;原位杂交结果显示,在小黄鱼中脑的视顶盖(OTec)、圆环体(TL)、结节前核(NAT)、外侧结节核(NLT)、下丘脑弥散核(NDLI)以及延脑(MO)中检测到大量LpNPFF mRNA阳性的细胞,而端脑和小脑部分的表达较少,这可能表示LpNPFF通过不同的途径向不同组织传递信号。并且在第Ⅱ期的小黄鱼卵巢细胞的细胞质中也能观察到明显的阳性信号;免疫组织化学结果显示,在小黄鱼脑部表层细胞和卵巢壁周围的结缔组织中可见明显的RFamide免疫阳性纤维;本实验还探究了LpNPFF对中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)蛋白分泌活性和小鼠巨噬细胞(RAW264.7)一氧化氮(NO)产生量的影响。体外细胞实验的结果表明,0.01μM~10μM的LpNPFF(1)和0.01μM、0.1μM的LpNPFF(2)对CHO-K1细胞总蛋白分泌活性抑制效果具有显著性(p<0.05)。0.01μM~100μM的LcGnRH3对CHO-K1细胞总蛋白的分泌量具有促进作用(p<0.05),当LpNPFF两个RFamide成熟肽分别和LcGnRH3共同作用于细胞时,LpNPFF(0.01μM~100μM)对由LcGnRH3引起的蛋白分泌量增加起到明显的抑制作用(p<0.05)。LpNPFF(1)和LpNPFF(2)能够抑制静止和LPS活化状态下RAW264.7细胞中NO的产生;此外,通过NPFF受体拮抗剂(RF9)初步验证了配体与受体之间的相互作用,RF9能够阻断配体与受体的结合,也进一步证明LpNPFF抑制了细胞分泌NO的量。上述研究结果有助于神经肽进化的进一步研究,也为进一步探索NPFF相关基因在生殖调控方面的功能提供了新的思路。