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胃癌(gastric cancer)是一种常见肿瘤,全球每年约有70万人死于胃癌。目前对胃癌的治疗以手术切除为主,同时配合放疗和化疗药物治疗,但由于放疗和化疗对机体正常细胞有副作用,导致临床疗效降低,病人预后不良。因此,寻求胃癌新的治疗靶标及药物成为目前亟待解决的问题。信号转导与转录激活子5A(signal transducer and activator of Transcription5A,STAT5A)是STAT家族中的一员。有研究表明,正常组织STAT5A的表达量较少,但肿瘤组织中STAT5A的表达量则会明显增多。此外,STAT5A与肿瘤细胞的增殖、分化、存活与凋亡存在着密切的关系。据文献报道,其下游有许多对应靶点,其中端粒酶是其重要靶点之一,当敲除STAT5A后,端粒酶的表达量减少,活性降低。端粒酶具有使细胞增殖分裂的作用,其活性的高低关系着肿瘤细胞增殖能力的强弱。因此,推测胃癌细胞的高度增殖可能与STAT5A表达增加,进而调节端粒酶活性影响细胞增殖能力相关。曲古菌素A(TrichostatinA, TSA)是一种广谱的组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases, HDACs)抑制剂。近年来发现,TSA对多种肿瘤具有促进凋亡及抑制增殖等作用。究其原因是由于TSA可以通过调节组蛋白乙酰化程度,从而调控肿瘤中相关基因转录及其蛋白的表达,进而干预肿瘤的生物学功能。目前,已有文献报道,TSA对胃癌细胞的增殖、凋亡、细胞周期等具有一定的调节作用,但具体机制尚未明确。实验目的:本实验旨在研究TSA是否通过调控STAT5A表达,对胃癌细胞增殖能力及其细胞周期产生影响;并且观察这种作用是否由调节端粒酶活性产生;探讨TSA的干预作用是否通过调控Ⅰ类HDACs活性而实现。实验方法:实验以胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823及胃上皮细胞系GES-1为观察对象,通过western blot技术检测其STAT5A表达;通过CCK-8法确定TSA给予的时间和浓度;通过western blot检测给药前后SGC-7901和BGC-823细胞系STAT5A表达的变化情况;随后通过CCK-8法和流式细胞术观察给药前后细胞增殖与细胞周期的变化情况;应用端粒酶活性检测试剂盒测定给药前后端粒酶活性变化情况;最后应用HDACs活性试剂盒检测给予TSA前后HDACs活性的变化情况。实验结果:实验发现,胃癌细胞系SGC-7901及BGC-823中STAT5A的表达量高于胃上皮细胞系GES-1中STAT5A的表达量,具有显著的统计学差异(P<0.05);给予300nM TSA后SGC-7901和BGC-823中STAT5A表达量均降低,且呈时间依赖性;其中胃癌细胞系BGC-823细胞在给予300nM TSA后STAT5A表达量降低尤为显著;给予300nM TSA后,检测SGC-7901和BGC-823细胞的增殖情况,结果显示,SGC-7901和BGC-823细胞的增殖明显受到抑制;给予300nM TSA孵育24h后,检测结果显示,SGC-7901和BGC-823细胞周期阻滞在G1期;此外,两种细胞给药后端粒酶活性均减弱,其中BGC-823细胞系给予300nM TSA后与未给予TSA的对照组相比,端粒酶活性降低具有显著性差异(P<0.01);SGC-7901和BGC-823细胞给药后HDAC1、2、3、8的活性均有不同程度的下降,并且在BGC-823细胞中上述四种HDAC活性下降更为明显。实验结论:1.胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823中STAT5A呈现高表达;TSA可以抑制胃癌细胞增殖,使细胞周期阻滞在G1期;2.TSA可时间依赖性地下调胃癌细胞中STAT5A的表达,并且降低端粒酶的活性;3.TSA降低胃癌细胞系中STAT5A的表达可能通过影响Ⅰ类HDACs活性实现的。