论文部分内容阅读
冬虫夏草为麦角菌科真菌寄生在蝙蝠蛾科幼虫上的子座和虫体,是一种名贵的药用真菌。冬虫夏草含有多种有效成分,如虫草素、虫草多糖、麦角固醇等。其中,虫草多糖含量最为丰富,且具有提高调节免疫力,降血糖及抗癌等多种功效。但天然冬虫夏草产量稀少,因此通过人工培养的方式生产冬虫夏草,从中提取虫草多糖已成为生产虫草多糖的一种趋势。本课题以农产副产物为原料,利用固态发酵培养的方式,采用单因素及正交优化相结合的方法,对冬虫夏草种子液和固态培养的培养基及培养条件进行筛选优化。液体种子发酵实验中以冬虫夏草菌丝体产量及菌丝得率为衡量标准,对种子液培养基成分及培养条件进行了筛选优化,确定了以葡萄糖为碳源,酵母浸粉为氮源。通过单因素实验和正交试验优化,最终确定的液态种子培养基为葡萄糖1.0%,酵母浸粉1.5%,MgSO4·7H2O 0.15%,KH2P04 0.15%,pH 6.0。液体培养的条件为温度22。C,装液量60%(v/v),培养时间为6天,菌丝得率可达到32%。固体培养优化以菌丝产量为衡量指标,通过对A、B、C和D等多种基质的筛选,以及对基质比、固液比、接种量等因素的优化,最终确定冬虫夏草固态培养的培养基为A加B,基质比为3：2,填装量45 g,X添加量3%,含水量125%,接种量25%,培养时间12d,此时菌丝得率相对最高,可达7.17%。多糖提取采用的是热水浸提法。通过分布醇沉后,利用Sephadex G-100凝胶色谱法分析不同浓度乙醇醇沉多糖成分,最终确定冬虫夏草多糖醇沉浓度为50%。通过对浸提时间、浸提温度和固液比这三个因素进行了单因素和正交优化,确定了固态发酵冬虫夏草多糖的提取工艺为浸提温度85℃,固液比1：100,浸提时间3.5 h,菌丝多糖浸提得率为2.4%。纯化的冬虫夏草多糖通过红外光谱进行结构分析,固态培养冬虫夏草多糖的红外光谱图显示其含有糖类特征吸收峰,主要为O-H伸缩振动吸收峰和C-H伸缩振动吸收峰,同时还有较弱的C=C伸缩振动吸收峰、,该多糖具有β-型糖苷键。