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2006年重庆市奶牛存栏2.2万头,年产奶量9-10万吨。奶牛乳房炎对奶牛业危害很大,给重庆市奶农造成的年经济损失超过1000万元。奶牛乳房炎主要由病原菌感染引起,发生后须用抗生素进行治疗,不仅引起产奶量下降甚至停奶,而且抗生素治疗后,牛奶中可长时间残留抗生素,按照规定,残留抗生素的牛奶必须废弃。为控制奶牛乳房炎,寻找无残留的新型药物,我们开展了重庆三个区县奶牛乳房炎细菌调查及应用溶菌酶防治该病的应用基础研究,获得如下结果。1、2006年9月至2007年6月,对重庆市合川、荣昌和渝北三区县共计9个奶牛场108份乳样,采用北京乳房炎检测法(Beijing mastitis test,BMT)检测,阳性65份,阳性率为60.2%(65/108),合川、荣昌和渝北三区县乳样阳性率分别为70%(21/30)、64.6%(31/48)、43.3%(13/30)。2、从65份BMT阳性乳样中分离到48株细菌,生化鉴定为葡萄球菌40株,占83.3%,大肠杆菌6株,占12.5%和链球菌2株,占4.2%。纸片法药敏试验结果是,所有分离菌中除一株葡萄球菌外全部对先锋类抗生素敏感,而对青霉素、氨苄青霉素等耐药感或低敏。结果显示,分离菌对青霉素、氨苄青霉素产生了广泛的耐药性。3、对奶样中分离到的40株葡萄球菌进行形态学、耐药谱和随意引物PCR(PCR witharbitrary primers,AP-PCR)分型。根据菌落与镜检形态差异,40株葡萄球菌可分为3类。第1类菌株26株,菌落金黄色,直径为2mm左右,镜检呈葡萄串状团块;第2类菌株9株,淡黄色菌落,直径为1mm左右,镜检呈类似葡萄串状,不规则团块,比第1类菌体略大;第3类5株,乳白色小菌落,0.2-0.3mm左右,镜检形态与1类相似。40株葡萄球菌耐药谱分为5类,即A、B、C、D、E。A类1株,对所检测的14种抗生素耐药;B类4株,对氧氟沙星耐药。C类7株,对链霉素敏感;D类25,对氨苄青霉素低度敏感;E类3株,对庆大霉素敏感。根据AP-PCR扩增的指纹图谱、遗传相似性系数矩阵和组间均联法分析,40株葡萄球菌可分为6个基因型,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型,分别有13、2、6、1、10与8株。从荣昌分离到23株葡萄球菌,形态分类全属于1类,耐药性分入A、B、D类,基因型Ⅰ有9株、基因型Ⅲ有3株、基因型Ⅴ有7株和Ⅵ基因型4株。合川分离到10株葡萄球菌,形态分类到1、2、3类都有,耐药性主要属于D、E类,基因型Ⅰ有3株、基因型Ⅱ、Ⅳ与Ⅵ各有1株、基因型Ⅲ与基因型Ⅴ各有2株。渝北7株葡萄球菌,形态上属于2类,耐药性上属于C类,基因型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ与Ⅴ各有1株、Ⅵ有3株。4、测定了这4种溶菌酶对分离菌的最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)。结果是,4种溶菌酶对分离的大肠杆菌、LY对葡萄球菌和链球菌及ZD对链球菌无抑菌作用。SK、GK、ZD对葡萄球菌的MIC分别为0.125mg/mL、0.312mg/mL、0.312mg/mL;SK、GK对链球菌的MIC分别为:0.125mg/mL、0.312mg/mL。采用微球菌比浊法、PAGE电泳法、考马斯亮蓝法测定4种溶菌酶样品SK、GK、ZD、LY酶活性分别为2100 U/mg、7320U/mg、1880U/mg和80U/mg;酶含量分别为280.1μg/mg、944.4μg/mg、ZD含有载体未能测出、976.6μg/mL。用紫外扫描法检测了SK与GK中不含抗生素。试验表明,溶菌酶SK样品对奶牛乳房炎分离菌抑菌效果最好,可作为奶牛乳房炎无抗治疗药物开发重点。