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目的:根据当前革兰氏阴性菌的耐药现状以及有限的治疗药物选择,探讨临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性和生物膜形成能力,系统评价多粘菌素E单用和联合用药对鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性,并初步建立小鼠上行性尿路感染(urinary tract infection,UTI)模型以评估多粘菌素 E 甲磺酸钠(colistimethate sodium,CMS)静脉给药的体内抗菌作用。方法:(1)根据微量肉汤稀释法测定多粘菌素E、舒巴坦、美罗培南、亚胺培南和多尼培南的MICs,并使用水晶球软件进行蒙特卡洛模拟分析,计算CMS在特定给药方案下对某一特定MIC值的达标概率(probability of target attainment,PTA)。(2)采用聚合酶链反应检测碳青霉烯类耐药基因blaoxA-23;棋盘法和时间杀菌实验用于评估由多粘菌素E、舒巴坦、美罗培南、亚胺培南和多尼培南两两结合组成的七个药物组合的体外协同抗菌活性;半定量结晶紫染色法用于评估鲍曼不动杆菌的生物膜形成能力以及抗菌药物组合对生物膜的抑制作用;采用红细胞裂解实验检测最佳抗菌药物组合的细胞毒性。(3)采用微量肉汤稀释法测定多粘菌素E对尿路致病性大肠杆菌(urinary tract pathogenic Escherichia coli,UPEC)的药物敏感性,通过单纯膀胱内注射UPEC菌悬液的方法初步建立上行性尿路感染模型,并根据细菌负荷量的测定和组织病理学检查结果评估CMS静脉内给药对抗UTI的功效。结果:(1)在106株鲍曼不动杆菌中,共有104株(98.1%)对多粘菌素E敏感,对舒巴坦、美罗培南、亚胺培南和多尼培南的耐药率分别达到了 81.2%、79.3%、77.4%和79.3%;蒙特卡洛模拟结果显示,当MIC<0.25μg/ml时,即使最小的给药方案(90mg CBA/day),也能得到理想的PTA值(PTA>90%);当MIC≥1μg/ml时,即使最大的给药剂量(300 mg CBA/day)也不能取得满意的效果。(2)测试的25株鲍曼不动杆菌均携带碳青霉烯酶耐药基因blaoxA-23;多粘菌素E与多尼培南组合在棋盘实验中对60%(15/25)的菌株显示出协同作用,具有最高的协同作用率,且没有表现出拮抗作用和细胞毒性;在时间杀灭实验中,多粘菌素E单药治疗在体外对敏感菌株表现出快速的杀菌作用,但随后出现再生长现象,基于多粘菌素E的组合能够抑制或减缓细菌的再生长;生物膜抑制实验结果显示84%的鲍曼不动杆菌能够形成生物膜,且基于多粘菌素E的抗菌药物组合对生物膜表现出最强的抑制作用。(3)体内研究结果表明静脉内施用CMS不仅能够减少小鼠尿液、膀胱和肾脏组织匀浆中的细菌浓度,而且能够降低感染组织的炎症程度并保持其结构的完整性。结论:体外高敏感性以及体内显著的抗菌活性表明CMS静脉给药将是治疗由多药耐药革兰氏阴性菌引起的尿路感染的一种有效策略,同时更加深入的体外研究数据支持多粘菌素E和多尼培南组合用于多重耐药革兰氏阴性菌引起的严重感染,尤其当多粘菌素E的MIC≥1 μg/ml时。