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次生代谢产物在人类的生活中有着不可小觑的作用,许多次生代谢产物表现出抗菌、抗肿瘤、抗炎等多种生物活性。而食药用真菌能够产生结构迥异,复杂多样的次生代谢产物。这些天然的活性产物可以作为新药物的研发的先导化合物,成为可开发利用的潜在资源,对解决人类各种复杂疾病具有重要的参考价值。深层发酵技术作为一种富集真菌次生代谢产物的高效的培养方法,为大量获得真菌次生代谢产物和菌丝体创造了有利条件。固体发酵技术也是产生大量次级代谢产物的有效方法。它与液体发酵的条件不同,可以获得与液体发酵不同的次级代谢产物。为了研究西藏野生菌种褐环粘盖牛肝菌Suillus luteus(L.:Fr)Gray的次生代谢产物,本实验通过液态深层发酵和固体发酵,获得其发酵物,并对其进行了提取分离。对其中的乙酸乙酯层浸膏进行了分离纯化,对所分离的部分化合物进行了细胞毒活性测试实验。野生褐环粘盖牛肝菌S.luteus(L.:Fr)Gray液体发酵过程中先经过摇瓶培养,确定最优培养配方为马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、酵母浸粉5g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1.5g/L、VB110mg/L,以OD600和菌丝体生物量为指标,得出当发酵至8.5天时,为褐环粘盖牛肝菌生长的最佳天数,OD600达到最低值,菌丝体干重为0.9186g/100ml。确定50L发酵罐扩大培养条件为装液量60%,接种量5%,设定温度26℃,pH自然,罐压0.05MPa,通气量0.6v/v.m,转速160r/min,培养时间204小时。其中还原糖含量随发酵时间的增加呈现先增长后下降的趋势,最终达到最小值;蛋白含量则是随发酵时间的延长一直呈上升趋势,最终蛋白含量明显多于发酵初期培养液中蛋白含量;胞外多糖含量在发酵出期无明显变化,随发酵时间的增加其含量直线上升,最终达到峰值。获得褐环粘盖牛肝菌液体发酵石油醚层浸膏6.2g,乙酸乙酯层浸膏16.5g,正丁醇层浸膏123.7g。胞外粗多糖127.2g,菌丝体干重421.3g。确定野生褐环粘盖牛肝菌S.luteus(L.:Fr)Gray固体发酵的培养基配方为纯大米+0.5g/L酒石酸铵。得到乙酸乙酯层固体发酵浸膏20g。对褐环粘盖牛肝菌液体发酵及固体发酵产生的次级代谢产物进行了研究。采用正相硅胶柱色谱进行基础性分离,凝胶LH-20柱色谱进一步分离纯化,用RP-HPLC方法制备,分别对液体发酵,固体发酵乙酸乙酯粗提物进行了化学成分研究。运用1H-NMR,13C-NMR等波谱学技术对化合物结构进行了鉴定。此次分离共得到11个单体化合物:环(酪氨酸-脯氨酸)二肽、环(苯丙氨酸-脯氨酸)二肽、丙三醇、环(缬氨酸-脯氨酸)二肽、木糖苷、赤藓醇、对甲基苯酚,化合物8(无法确定化合物的结构),邻苯二甲酸正丁酯,油酸,新肌醇。化合物均为首次从褐环粘盖牛肝菌Suillus luteus(L.:Fr)Gray发酵液和固体发酵物中分离获得。本实验对部分单体化合物及发酵提取物进行了体外抗肿瘤实验(MTT法)研究。结果表明,单体化合物N1对S180的抑瘤作用最好,其IC50值为0.073mg/ml。液体发酵浸膏对B16的抑瘤作用最好,其IC50值最小为0.0735mg/ml。液体发酵浸膏对MCF-7的抑瘤作用最好,其IC50值最小为0.0828mg/ml。