【摘 要】
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荷青花[Hylomecon japonica（Thunb.）Prantl＆Kündig],是罂粟科白屈菜族荷青花属植物。荷青花植物生物资源十分丰富,广泛存在于我国东北、华中及华东等地区,多以根或根茎入药,用于治疗劳伤过度、风湿性关节炎等疾病。荷青花植物中主要活性成分有生物碱、黄酮类化合物、萜类化合物、酚类化合物、皂苷类化合物,具有抗癌、抗菌、抗炎等生物活性。本实验室前期研究证明荷青花总皂苷对人肝癌
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荷青花[Hylomecon japonica（Thunb.）Prantl＆Kündig],是罂粟科白屈菜族荷青花属植物。荷青花植物生物资源十分丰富,广泛存在于我国东北、华中及华东等地区,多以根或根茎入药,用于治疗劳伤过度、风湿性关节炎等疾病。荷青花植物中主要活性成分有生物碱、黄酮类化合物、萜类化合物、酚类化合物、皂苷类化合物,具有抗癌、抗菌、抗炎等生物活性。本实验室前期研究证明荷青花总皂苷对人肝癌细胞Huh7有显著的抑制作用,但是荷青花总皂苷体内抗肿瘤活性尚不清楚。因此,本文首先利用网络药理学探究荷青花总皂苷的物质基础和多成分多靶点协同作用的抗肝细胞癌作用机制,预测了荷青花总皂苷的抗肝细胞癌作用。进而以H22肝癌小鼠为模型,探究荷青花总皂苷体内抗肝细胞癌作用。研究结果如下:1.采用实验室优化的荷青花总皂苷最佳提取工艺:乙醇浓度60%,固液比1:18,提取时间3天、提取次数3次,进行冷浸提取。提取物进一步通过D101大孔树脂柱色谱法分离,最终从20 kg荷青花干燥全草中得到550.71 g荷青花总皂苷提取物。2.建立了比色法测量荷青花中总皂苷含量,测得荷青花总皂苷提取物中总皂苷含量为86.44%。3.通过分析荷青花中各单体皂苷在总皂苷高效液相色谱图中的出峰位置与峰面积比值,计算了各单体皂苷在荷青花总皂苷中的相对含量,结果表明含量较多的单体皂苷如Hylomeconoside A、Hylomeconoside B、Hylomeconoside C、Hylomeconoside D和Lucyoside P五种单体皂苷的含量之和占据了荷青花总皂苷的57.87%。4.网络药理学研究发现荷青花中皂苷类化合物发挥抗肝细胞癌作用的主要活性成分有Hylomeconoside K、Hylomeconoside A、Hylomeconoside C、Hylomeconoside B、Hylomeconoside D、Hylomeconoside E;作用的关键靶点有JUN、MMP9、BCL2L1、F2、GLI1、AR、IKBKB、TNF、IL-2、IFNA1等;主要富集的信号通路包括靶向肿瘤细胞凋亡通路、乙型肝炎通路、人类免疫缺陷病毒感染通路、脂质和动脉粥样硬化通路、人乳头瘤病毒感染通路等。5.构建H22肝癌模型小鼠,采用灌胃方式给药荷青花总皂苷,探究荷青花总皂苷体内抗肝细胞癌作用,同时观察荷青花总皂苷对H22肝癌模型小鼠体质量,胸腺指数,脾脏指数,血液学指标,细胞因子（IFN-γ、TNF-α、IL-2）含量,肝肾功能,肿瘤组织病理学的影响。实验结果表明,荷青花总皂苷低、中、高剂量组的抑瘤率分别为29.37%、28.46%、32.30%,其中荷青花总皂苷高剂量组抑瘤率大于30%,可认为具有抗肿瘤作用;同时,荷青花总皂苷对H22肝癌模型小鼠体质量,胸腺指数,脾脏指数无明显影响及损伤,且荷青花总皂苷对H22肝癌模型小鼠未产生肝肾毒性。肿瘤组织HE染色结果显示,荷青花总皂苷低、中、高剂量组小鼠肿瘤细胞数量减少,出现局部坏死区域,说明荷青花总皂苷对H22肝癌模型小鼠体内肿瘤细胞有一定杀伤作用;荷青花总皂苷能提高H22肝癌模型小鼠中性粒细胞,TNF-α,IL-2含量,且具有剂量依赖性,因此推测荷青花总皂苷抗肿瘤作用机制可能与增加血液中中性粒细胞含量、提高TNF-α,IL-2表达水平有关。
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