毛白杨4-香豆酸:CoA连接酶(4CL2)启动子组织特异性的研究

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木质素是植物体中一种大分子有机物,具有重要的生物学功能,但在造纸工业中成为主要的废弃物,在饲草中影响牲畜的消化与吸收,利用生物技术手段降低植物体中木质素的含量一直是热点。4CL(4-Coumarate:CoA ligases,4-香豆酸CoA连接酶)是连接苯丙酸途径与木质素特异合成途径的关键酶,通过了解4CL基因启动子的结构、调控机制,调控植物体内木质素含量目前也是一个研究热点。   本文为了研究毛白杨(Populus tomentosa Carr.)中4-香豆酸CoA连接酶(4-Coumarate:CoA ligases,4CL2)基因启动子的结构,分析其组织器官特异性,利用PCR技术从三倍体毛白杨中克隆出4-香豆酸CoA连接酶基因5端上游全长933bp的启动子(4CL2p),利用启动子5端系列缺失的方法,克隆出9段不同长度的4CL2启动子片段,4CL2-A1、4CL2-A2、4CL2-A3、4CL2-A4、4CL2-A5、4CL2-A6、4CL2-A7、4CL2-A8、4CL2-A9,分别位于4CL2基因5端上游-440/0、-414/0、-385/0、-335/0、-309/0、-472/0、-374/0、-360/0、-295/0处,使这9个片段与GUS融合基因构建植物表达载体,以模式植物烟草(Nicotiana tabacum L.)为实验材料,研究9段启动子序列在植物中的组织特异性表达,发现4CL2基因5端上游-360bp~-487bp区域内存在着4CL2启动子在植物叶中特异性表达的重要调控元件,4CL2基因5端上游-282bp~-309bp区域内的启动子片段中含有重要的顺式作用元件调控基因的表达,最短的4CL2基因5端上游0~-309bp区域仍能够驱动GUS基因在烟草维管束特异性表达。
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