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本研究主要检测了碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在水牛类胚胎生殖干细胞(EG-like)形成过程中的作用,并进一步利用与bFGF信号转导相关的信号阻断剂来研究PGCs重编程为EG-like细胞的分子机制,以期为水牛EG细胞系的建立提供有意义的指导。(1)对水牛类胚胎生殖干细胞饲养层体系的建立进行了研究。结果发现：组织块法培养获得的细胞状态优于酶消化法,组织块法更适合水牛胎儿成纤维细胞的分离培养：并且细胞传至三代,状态良好且核型正常率为80%,可用于饲养层的制备；经MTT法和Brdu免疫荧光检测,确定10μg/ml的丝裂霉素C处理水牛胎儿成纤维细胞3.5h既能有效抑制成纤维细胞增殖又能保持细胞良好的状态；并且能维持水牛胚胎生殖干细胞至8代。(2)对水牛原始生殖细胞(PGCs)体外培养特征进行了研究。结果表明：分离的PGCs呈圆形或椭圆形,比一般体细胞大,AP染色阳性；体外培养部分PGCs具有能动特性；培养4-5d,部分PGCs形成形态差异的克隆,部分以2个或3个PGCs聚集体形式存在。表明体外培养的PGCs具有异质性。(3)对水牛EG-like细胞的多能性进行了研究。结果表明水牛EG-like细胞表达AP、SSEA-1等细胞表面抗原；免疫荧光结果表明克隆表达Oct4 Nanog、Sox2、c-Myc等多能性因子；PCR检测再次证明克隆表达Oct4、Nanog、Sox2等多能性因子；体外分化实验表明克隆经悬浮培养能形成拟胚体,进一步单层分化可形成成纤维样、上皮样、平滑肌样等细胞类型。体外培养具有一定的自我更新能力,能扩增到8代。(4)对bFGF在水牛PGCs重编程为EG-like细胞过程中的作用进行了研究。结果发现bFGF在EG-like细胞形成过程中发挥至关重要的作用,随着bFGF添加浓度的升高(0,10,20,40ng/ml), EG-like细胞克隆形成数增多,克隆直径增大,当浓度为20ng/ml时效果最好。(5)对bFGF促进EG-like细胞形成的机制进行了研究。结果表明：水牛PGCs重编程为EG-like细胞过程中,PI3K/AKT信号路径发挥主要作用,MAPK路径起着促进增殖的协同作用；P53失活促进水牛PGCs重编程为EG-like细胞。推测在水牛PGCs重编程为EG-like细胞的过程中,关键的信号调控事件是：bFGF激活PI3K/AKT信号通路,进一步调控P53失活起主要作用；同时激活MAPK信号路径,起着促进增殖的协同作用。