背景与目的：冠状动脉搭桥手术失败的主要原因是移植物的再狭窄。其中心环节是血管平滑肌细胞(VSMC)增生。造成VSMC增生的发病机制尚未完全阐明。目前认为，多种血管活性物质可能共同参予了再狭窄的发生发展。C-myc是近年来研究较多的转录因子。大量研究表明，C-myc是一个早期应答基因，参予了细胞的生成，增殖，分化及凋亡。它是细胞生长因子如血小板源性生长因子(PDGF)，成纤维细胞生长因子(TGF)，转化生长因子(TGF)发生作用的共同途径。应用反义c-myc基因抑制c-myc基因的表达，从而治疗血管再狭窄是目前心血管研究的热点。但以往大量实验多限于动脉及离体动物，对在体静脉移植物中C-myc的表达则研究较少。另外，目前转基因方法多采用球囊导入及逆转录病毒载体导入。该方法不但费时，且造价昂贵，尚有导入效率低毒性大等众多问题。本研究在兔静脉移植物郑州大学2002年硕士论文 可溶性支架转染。－myc反义寡核昔酸预防静脉移植物再狭窄中运用可溶性支架导入反义C－p C旨在深入了解C－y C在在体静脉移植物中不同时间的的表达及其与内膜增殖的关系；并确定可溶性支架转反义C－p C是否具有抑制静脉移植物内膜增殖的 严效果，以进一步探讨基因导入的理想方法。 对象与方法：（）25只健康纯种新西兰大耳白兔将按体重随机分五组，每组5只。将颈外静脉间置于同侧颈总动脉，分别在术后6小时，2天，7大，14天，28天取材。应用免疫组化和形态学分析观察不同时间C－myc阳性细胞数的表达，采用计算机图象分析法测量管腔内膜，中膜厚度及其比值。Q）25只健康纯种新西兰大耳白兔按体重随机分对照组，支架组，正义组，反义组，错配组，将颈外静脉间置于同侧颈总动脉后用可溶性支架将反义，正义及错配的C－p C基因片段导入静脉移植物。术后28天取材制片，显微镜进行形态学观察。采用计算机图象分析法测量管腔内膜，中膜厚度及其比值。 结果：＊）实验过程中无实验动物死亡。吻合口完成时各吻合口均通畅。在一周时内膜和中膜厚度为71．07士4．661，50．77士3．082（卜m），较6小时明显增厚，有显著性差异（P＜0．of）。而在14 天时内膜和中膜厚度为74．36士6．479（Pm），56．99士6．418（卜＊），28天时内膜禾中膜厚度为80．80士2．710（卜＊），58．06士4．620…m人 较 7天没有明显变化，无显著性差异 u＞0．05人提示 7天是血管重塑的高峰期。② 移植后 6小时 二 郑州大学2002年硕士论文 可溶性支架转染。－mvc反义寡核昔酸预防静脉移植物再狭窄 至7天，c皿yc蛋白VSMC逐渐增多，于7天达高峰。c血yc蛋白 VSMC数为14．800士1．924，与移植后6小时相比差异有显著意义 （p＜0．of）。在移植后14天，28天c－。ye蛋白VSMC开始下降，0 c－myc蛋白 VSMC数分别为 7．800土 0．837，4．200士 0．837，与移 植后7大相比差异有显著意义bm．of人 结果提示C、yC阳性 细胞数在移植后7天达高峰，这与内膜迅速增殖的高峰期相吻 合。说明c1yc蛋白表达与内膜增殖有密切联系。u）术后28 天反义寡核昔酸可溶性支架组静脉桥的内膜厚度为43．77士 5．891（卜m），显著低于其他组（p＜o．of）。而空白对照组、单纯 可溶性支架组、正义寡核昔酸可溶性支架组及不匹配寡核昔酸可 溶性支架组内膜厚度分别为 80．00土 1．335（Pm），76．06士 4．242 （ym），74．80土9．635（Pm），79．62士7．916（卜m），无显著性差 别b川．05人5组间的中膜厚度亦无明显差异。反义组内膜与 中膜比值为0．68士8．701，明显低 于其它组（P＜0．01）。而空白 对照组、单纯可溶性支架组、正义寡核苦酸可溶性支架组及不匹 配寡核昔酸可溶性支架组比值分别为1．42士0．066，1．35士 0．198，1．34土0．258，1．41士0．235，无显著性差另（p＞0．05）。 说明反义c1yc局部应用后可明显降低静脉移植物内膜增生程 度，但对中膜厚度没有明显影响。内膜增殖与中膜平滑肌细胞向 内膜迁徙有关。 结论：门）本研究进一步证明c折yc阳性细胞数在移植后7 3郑州大学2002年硕士论文 可溶性支架转染。－y。反义寡核昔酸预防静脉移植物再狭窄天达高峰。这与内膜迅速增殖的高峰期相吻合。结果提示c1yc蛋白表达与内膜增殖有密切联系，可做为一个早期指标反应血管损伤后内膜的增殖。＊）本研究证实运用可溶性支架转反义