目的探讨铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）上清液诱导小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）凋亡过程中磷酸肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路的表达情况,以阐明PI3K/Akt通路在此凋亡过程中的作用。方法采用MTT法检测细胞增殖情况,得到适宜的作用时间,PA上清液根据浓度的不同分为,对照组（只加入等容积的培养基）、10%PA上清液组、20%PA上清液组、30%PA上清液组(PA浓度^[1]为PA上清液与培养基的体积比)、对照+LY294002组、10%PA上清液+LY294002组、20%PA上清液+LY294002组、30%PA上清液+LY294002组,分别作用6h、12h、24h。LY294002为PI3K阻滞剂,根据预实验结果及说明书选取20μmol/L的浓度,根据MTT的结果,选取12h为上清液作用细胞的处理条件,之后实验分组均同MTT实验分组。Hoechst33342染色观察细胞核形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Akt及p-Akt蛋白的表达情况,用SPSS23.0软件进行数据分析。结果1、MTT结果显示,在6h、12h、24h时,实验结果均与对照组结果相比,细胞的增殖抑制率在加入PA上清液后均明显增加（P<0.05）。同一时间不同浓度的PA上清液组之间相比较,随着PA上清液浓度的增加细胞增殖抑制率有所增加（P<0.05）。12h时不同浓度的PA上清液组与6h组比较和24h不同浓度PA上清液组与12h组比较,随着作用时间的延长细胞增殖抑制率均有所增加（P<0.05）。筛选出后续实验的作用时间是12h。加入LY294002后,与未加抑制剂组比较,对照组、6h、12h、24h组细胞增殖抑制率均增加（P<0.05）。说明RAW 264.7细胞的增殖能够被PA上清液呈浓度-时间依赖性抑制。2、流式细胞仪检测的细胞凋亡结果表明,与对照组相比较,用不同浓度的PA上清液感染RAW 264.7细胞12h后,随着PA上清液浓度的增加RAW264.7细胞凋亡率有所增加,差异有统计学意义（P<0.05）。加入LY294002抑制剂后,RAW264.7细胞的凋亡率均有所增加,差异有统计学意义（P<0.05）。提示PA上清液能够诱导增加RAW264.7细胞的凋亡,且具有浓度依赖性,LY294002阻滞剂可以增加巨噬细胞的凋亡率。3、Hoechst33342染色实验结果显示,与未加PA感染组细胞相比较,经PA上清液处理RAW 264.7细胞12h后,细胞核发生改变,呈现亮蓝色、固缩、破碎,凋亡小体形成,呈现出细胞凋亡的表现,随着PA上清液浓度的增加,细胞核凋亡的改变逐渐明显,提示随着PA上清液浓度的增加诱导RAW264.7细胞凋亡逐渐增加。4、实验Western blot的结果显示,与对照组相比,PA上清液组能够以浓度依赖性的方式使p-Akt蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）,同时各组Akt蛋白表达水平无变化,差异无统计学意义（P>0.05）;加入阻滞剂后的各组p-Akt蛋白表达均进一步降低,差异有统计学意义（P<0.05）。加入阻滞剂后的各组Akt蛋白表达无变化,差异无统计学意义（P>0.05）。结论1、PA上清液能诱导巨噬细胞RAW264.7的凋亡,且呈现出浓度及时间依赖关系。2、LY294002能够抑制PI3K/Akt活性,提示PI3K/Akt信号转导通路可能参与了PA诱导的RAW264.7细胞凋亡的过程。