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一.研究目的本研究通过观察200mmol/L高渗钠盐液(HS)和乳酸钠林格液(LR)对严重烫伤大鼠液体复苏的效果,从炎症因子,氧化损伤,信号转导通道等方面阐述200mmol/L高渗钠盐液(HS)对大鼠严重烫伤后肠损伤影响的分子机制。二.研究方法于安徽医科大学实验动物中心预先购置56只雌性SD大鼠,体重在200-250g。将购买的大鼠适应性饲养一周,实验前将其随机分成三组:对照组(8只)、LR组(24只)、HS组(24只)。所有大鼠使用尾静脉置管,去除所有大鼠背部毛发,假烫伤组大鼠不予烫伤,LR组与HS组给予大鼠背部烫伤。烫伤组分别使用LR复苏和HS复苏。LR组和HS组大鼠均在伤后2小时、8小时和24小时处死取血以及肠组织。第一部分:200mmol/L高渗钠盐复苏液对严重烫伤大鼠血钠,肠道水肿以及炎性因子表达的影响分别称取三组大鼠肠组织干重与湿重并测量血浆钠浓度、计算肠含水量,使用酶联免疫吸附法(ELISA)测量血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)以及高迁移率蛋白B1(HMGB1)。将取得数据进行统计分析。第二部分:200mmol/L高渗钠盐复苏液对严重烫伤大鼠肠道氧化损伤以及肠血管内皮细胞的影响将三组大鼠的一部分肠组织进行丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和二胺氧化酶(DAO)活性测定。另一部肠组织在使用10%甲醛固定后使用免疫组化法测定血管性血友病因子(VWF)以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的活化程度。第三部分:200mmol/L高渗钠盐复苏液对严重烫伤大鼠肠组织p38MAPK以及JNK通道影响使用蛋白质印迹法(Western Blot)测量三组大鼠肠组织中p38MAPK以及JNK通道的活性表达并进行统计学分析。三.结果第一部分LR组血钠浓度明显低于HS组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。HS组与对照组无明显差异(P>0.05)。在使用LR组与HS组复苏后,肠组织含水量均高于于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),HS组与LR组相比其肠组织含水量比较低,差异具有统计学意义(P<0.01)。LR组各时间点血TNF-α、IL-1β浓度均高于相应HS组差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。LR组和HS血HMGB1与对照组相比在伤后2小时无明显差异(P>0.05),但8小时和24小时点均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),LR组伤后8小时和24小时血中HMGB1浓度均高于相应的HS组,差异具有统计学意义(P<0.01)。第二部分LR组和HS组各时间点肠组织MDA含量均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。 LR组各时间点的肠组织MDA含量均高于HS组,差异具有统计学意义(P<0.05)。LR组与HS组肠组织SOD与DAO活性均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。LR组肠组织SOD与DAO活性均低于各时间点的HS组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。肠组织VWF及ICAM-1免疫组化活性显示:与HS组相比,LR组各时间点肠组织ICAM-1表达均增强而VWF表达减弱。第三部分肠组织p38MAPK及JNK通道的活性表达检测示:LR组和HS组在2h,8h,24h三点,肠组织p38MAPK及JNK通道的活性表达均比对照组高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其中LR组各时间点肠组织p38MAPK及JNK通道活性表达均高于HS组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。四.结论(1)与LR相比,使用200mmol/L的HS进行液体复苏能防止低钠血症的发生,减轻大鼠严重烫伤后的肠道水肿并能抑制相关炎性因子的表达。(2)与LR相比,使用200mmol/L的HS进行液体复苏能减轻严重烫伤大鼠伤后肠道的氧化损伤,并能有效保护肠血管内皮细胞。(3)与LR相比,使用200mmol/L的HS进行液体复苏能降低严重烫伤大鼠肠组织中p38MAPK和JNK通道的活性表达。