[目的]研究推拿对P物质(Substance P,SP)的表达影响,探讨坐骨神经损伤(Sciatic nerve injury, SNI)恢复的机理。(1)通过光热耐痛阈观察大鼠的感觉反应、(2)通过HE染色观察脊髓与背根节的神经元形态、(3)通过推拿治疗,采用免疫组化法观察对脊髓与背根节中的P物质推拿的影响。以这三方面从感觉传导途径,进一步阐明推拿治疗周围神经损伤的机理,为临床上推拿治疗周围神经损伤(Peripheral nerve injury, PNI)性疾病提供可靠依据。[方法]选用SD大鼠作为实验动物,制备成SNI模型；使用随机表将SD大鼠分成5组：正常组、推拿组、模型组、假手术组和模型对照组。其中对推拿组、模型组和模型对照组制备SNI模型(右侧大腿),并且在造模7d后开始对推拿组手法干预(共治疗20次,每日1次,每10次休息1d),模型对照组仅给予抓握束缚。推拿干预：本次实验采用按摩推拿手法模拟仪,并针对SNI,以模拟拨法、揉法、点法进行推拿干预(穴位选取,右侧的殷门、承山、阳陵泉)。(1)通过光热耐痛阈,观察大鼠痛觉反应,评价感觉功能恢复程度。(2)通过HE染色观察神经元形态,评价神经元损伤以及修复情况。(3)通过免疫组化法,定性定位定量分析脊髓、背根节处P物质的表达,探讨周围神经损伤再生机制。[结果]1行为学-光热耐痛阈实验结果(1)造模7d后,模型组的痛觉反应时间高于正常组有明显差异(P<0.05),假手术组与正常组相近(P>0.05),说明模型成功。表明SNI,大鼠的痛觉反应延迟,因为痛觉传导通路出现障碍,是神经纤维出现不连续性所造成的。(2)20次推拿干预后,模型组的痛觉反应时间高于推拿组(P<0.05),模型对照组与模型组无显著差异(P>0.05),说明推拿可促进感觉神经修复,恢复痛觉传导通路,进而提高SNI大鼠的痛觉反应灵敏度2形态学-推拿干预20次后的HE染色结果(1)观察在背根节染色的结果：正常组：神经元多为圆形,而且体积较大,细胞胞核大且圆,核仁清晰。胞体外围有一层卫星细胞,可见许多神经纤维。模型组：神经元外观较不规则而且有变性以及肿胀,导致细胞间隙明显减少,核仁模糊。神经纤维排列散乱。推拿组：神经元有轻度变性以及肿胀,细胞间隙减少不明显,大部分核仁清晰,小部分神经纤维排列散乱。假手术组神经元外观与正常组相近。模型对照组与模型组相似。(2)观察在脊髓背角HE染色结果：正常组：神经元可见清晰核仁,核居中,排列整齐,尼氏体颗粒清晰。模型组：神经元可见变性与肿胀,其数量减少,排列散乱,而且不见尼氏体。推拿组：神经元有轻度损伤,但大部分可见正常外观,其排列较规则,有新生的神经元。假手术组神经元外观与正常组相近。模型对照组近似模型组。3组织细胞学-免疫组化结果(1)观察在背根节中P物质的平均光密度(IOD)结果：造模7d后,模型组P物质的表达高于正常组和假手术组,有明显差异：(P<0.05)。20次推拿干预后,正常组明显低于模型组(P<0.05),推拿组则高于模型组(P<0.05),模型组与模型对照组相近,无明显差异：(P>0.05)。(2)观察在脊髓中P物质的10D结果：造模7d后,模型组高于正常组和假手术组有明显差异(P<0.05)。20次推拿干预后,正常组P物质表达明显低于模型组(P<0.05),推拿组则高于模型组(P<0.05)。模型组与模型对照组相近,无明显差异(P>0.05)。[结论]1通过行为学观察光热耐痛阈的结果,大鼠的疼痛反应时间减少,即推拿可以帮助大鼠痛温觉的恢复。2通过形态学观察HE染色的结果,推拿对神经元有保护和帮助SNI修复的作用。3通过组织细胞学-免疫组化法对脊髓与背根节中的P物质定量分析结果显示,推拿可以促进P物质在大鼠脊髓、背根节的表达。4推拿治疗周围神经损伤的机理之一；P物质在神经内分泌网路中的调控作用是与免疫细胞的特异受体结合,通过刺激有P物质受体的靶细胞释放细胞因子,调控内在环境。而推拿通过P物质的释放以调控内在环境帮助,从而起到保护神经元帮助受损细胞修复。综合上述,推拿可以帮助P物质的表达与痛温觉恢复,并且P物质与传导感觉的神经恢复有正相关,即P物质的表达量可以用来评价推拿疗效与SNI恢复程度。