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已有研究表明两栖类皮肤活性肽具有广谱抗病原微生物特性外,还有抗肿瘤活性,且对正常真核细胞几乎无影响,因而从两栖类皮肤活性肽中筛选具有抗肿瘤活性的多肽分子,使其成为抗肿瘤药物候选分子的新来源具有重要的意义。方法:以两栖类代表物种东北林蛙(Rana dybowskii)为实验对象,电刺激(5V,20Hz)蛙背部皮肤收集分泌物,优化高效液相色谱(HPLC)纯化条件,分离纯化皮肤分泌物。筛选SAH水解酶活性抑制试验阳性的纯化肽组分,MTT比色法检测其筛选多肽对人前列腺癌细胞(PC-3)的存活率,全细胞膜片钳技术观察初筛肽组分对Vero细胞、PC-3细胞钾离子通道的影响。结果:(1)优化了东北林蛙皮肤活性肽HPLC最佳分离纯化体系,即流动相为乙腈:甲醇:水-TFA(9:1:90),流速为0.5ml/min,检测波长为216nm和280nm,洗脱时间为30-40min。并从蛙皮肤分泌物中获得14个肽组分dybowskiiⅠ-ⅩⅣ。(2)SAH水解酶活性抑制试验显示dybowskiiⅠ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅺ、ⅩⅣ对SAH水解酶均呈不同程度抑制。(3)MTT测定结果显示dybowskiiⅠ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、ⅩⅣ随浓度(0.015、0.03、0.06、0.12μg/ml)递增其PC-3细胞存活率均呈下降趋势,尤以0.12μg/ml浓度dybowskiiⅥ最为显著(降低至40.2%),而dybowskiiⅪ对PC-3细胞存活率几乎无影响(91.5%)。倒置显微镜观察PC-3细胞折光性增强、细胞变圆、脱壁细胞增多。(4)全细胞膜片钳显示dvbowskiiⅥ为0.12ug/ml时可抑制PC-3细胞延迟整流钾离子通道,而对Vero细胞无影响。结论:(1)建立了东北林蛙皮肤活性肽HPLC分离纯化体系,即流动相为乙腈:甲醇:水-TFA(9:1:90),流速为0.5ml/min,检测波长216nm和280nm,洗脱时间30-40min。分离获得14个皮肤活性肽组分dybowskiiⅠ-ⅩⅣ。(2)其中,dybowskiiⅠ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅺ、ⅩⅣ对SAH水解酶活性有抑制作用。(3)MTT比色法检测和倒置显微镜观察显示dybowskiiⅠ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、ⅩⅣ对PC-3细胞生长有抑制作用,以dybowskiiⅥ最为显著。(4)全细胞膜片钳显示dybowskiiⅥ可抑制PC-3细胞延迟整流钾离子通道。