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研究目的:
1.观察大鼠癫痫持续状态后大脑海马神经元中TUNEL阳性细胞个数以及XIAP与Caspase-9的表达情况:
2.研究盐酸法舒地尔对大鼠癫痫持续状态后大脑海马神经元凋亡的作用及其机制。
研究方法:
选用54只健康、成年、雄性、鼠龄3~4个月、体重180~240gWistar大鼠,进行如下试验:
1.分组
将这54只大鼠按照以下方法随机分为三组:对照组(6只)、模型组(24只)和盐酸法舒地尔组(24只),其中,模型组和盐酸法舒地尔组再分别分为四个组:6h组、12h组、24h组、48h组,每个组6只。
2.造模
造模前1小时:对照组和模型组大鼠给予腹腔注射50ml/kg生理盐水,盐酸法舒地尔组大鼠给予腹腔注射50mg/kg盐酸法舒地尔;
l小时后:模型组及盐酸法舒地尔组大鼠给予腹腔注射127mg/kg的氯化锂;
18小时后:制备癫痫持续状态,模型模型组及盐酸法舒地尔组大鼠给予腹腔注射匹罗卡品30mg/kg,同时给对照组大鼠给予腹腔注射30ml/kg生理盐水。
3.实验方法
观察并记录下大鼠癫痫发作的时间点和发作时的行为学表现,各组大鼠分别在其SE后相应的时间点断头取脑,对大鼠大脑海马组织进行HE染色,光镜下观察其形态学变化,采用SABC法检测XIAP和Caspase-9蛋白的表达情况,TUNEL检测法检测SE后大鼠大脑海马神经元的凋亡情况。
结果:
癫痫持续状态后,通过观察和分析可以得出如下的结果:
1.模型组和盐酸法舒地尔组海马组织XIAP的表达较对照组显著增多,XIAP的表达高峰出现在12h。盐酸法舒地尔组各个时间点的XIAP的表达较模型组显著增多(均为P<0.05)。
2.模型组和盐酸法舒地尔组大脑海马组织中Caspase-9的表达较对照组显著增多,Caspase-9的表达高峰出现在24h,盐酸法舒地尔组各个时间点的Caspase-9的表达较模型组显著减少(均为P<0.05)。
3.模型组和盐酸法舒地尔组大脑海马组织中TUNEL的表达较对照组显著增多,TUNEL的表达高峰出现在24h,盐酸法舒地尔组各个时间点的TUNEL的表达较模型组显著减少(均为P<0.05)。
结论:
1.SE后XIAP与Caspase-9表达均大量增多,由此我们可以推测:XIAP与Caspase-9可能全部都在SE后大脑海马组织的凋亡过程中发挥了作用。
2.盐酸法舒地尔可以通过促进XIAP蛋白的含量进而抑制Caspase-9蛋白对细胞凋亡的作用,从而减少癫痫持续状态后脑组织凋亡细胞的数量。