fat-1基因来源于秀丽隐杆线虫C.elegans，翻译产物是ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶，此酶的功能是以18-20碳的ω-6PUFAs为底物进行脱氢反应，生成相应的ω-3PUFAs，平衡体内ω-6/ω-3PUFAs的比例，对于预防和治疗心脑血管、肿瘤、精神分裂症等疾病有重要的作用。海洋生物、蔬菜和一些坚果中含有丰富的ω-3PUFAs，而肉类食品中的ω-3PUFAs却很少，因此，通过饮食方式摄取ω-3PUFAs的效率很低;而哺乳动物体内缺乏合成ω-3PUFAs前体的酶，也缺乏能将ω-6PUFAs转化为ω-3PUFAs的酶，这使得通过在哺乳动物体内增加外源性的ω-3PUFAs脱氢酶来增加ω-3PUFAs的含量成为一个可取的途径。秀丽隐杆线虫属于真核生物，但是其基因编码方式更接近于原核生物，为了实现fat-1基因在小鼠脂肪中的表达，本实验将fat-1基因按照真核生物密码子偏好性进行了密码子的优化，合成、测序后，采用定向克隆的方法将其重组于pcDNA3.1(+)载体上，构建pcDNA3.1-fat-1(+)真核表达载体。　　 过去的研究表明，利用转基因技术可以实现外源基因的非特异性广泛表达，然而，这种外源基因的非特异性广泛表达往往会对转基因动物本身造成负面影响，而这种影响很有可能是由目的基因的异位表达造成的，即外源基因在它原本不表达的组织发生表达，脱离了正常的生理轴制约，从而使表达产物的生理功能发生改变。目前，解决异位表达问题的一个有效途径就是构建外源基因的特异性表达载体，将目的基因的表达限制在单一或少数必要的组织器官中。这样既可实现转基因的目的，又可避免目的基因在不必要的组织器官中表达带来的负效应。具体到fat-1基因，我们希望它的表达能够限制在脂肪组织中，对于哺乳动物而言，脂肪酸的合成几乎都是在脂肪组织内完成的，而同时脂肪组织也是人类消费畜产品的重要形式。　　 要构建一个特异高效表达的表达载体，启动予的选择非常重要。启动子是一段位于结构基因5端上游区的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地结合并具有转录起始的特异性。增强子是指增加连锁基因转录频率的DNA序列，其通过启动子增加转录。一个增强子并不限于促进某一特殊启动子的转录，其能刺激在它附近的任一启动子，并且增强子具有组织特异性，例如免疫球蛋白基因的增强子只有在B淋巴胞内活性才最高。除此以外，在胰岛素基因和胰凝乳蛋白酶基因的增强子中也发现有很强的组织特异性。ap2基因编码一种脂肪组织特异蛋白-脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(Ap2，p2adipocyteprotein)，有研究表明，该基因转录起始位点上游-4.9kb到-5.4kb的518bp的增强子序列是ap2基因组织特异性表达的主要决定元件，-1.7kb到+21bp是该基因有启动活性的最小启动子序列。本实验克隆了ap2基因最小启动子序列1900bp和518bp的增强子序列，通过酶切连接到EGFP(EhancedGreenFluorescentPortein，EGFP)载体上，构建真核表达载体。通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组质粒进行鉴定，并转染小鼠前脂肪细胞，通过荧光素酶活性检测特异性表达强度及启动子活性。结果表明，成功构建了小鼠脂肪组织特异表达载体并且ap2启动子具有活性。将该启动子重组于pcDNA3.1-fat-1(+)，构建脂肪组织特异表达的fat-1重组载体，为以后的转基因动物的研究奠定了基础。