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背景与目的炎症性肠病是一组以反复的胃肠道慢性炎性反应作为主要表现的免疫相关疾病,在发达国家患病率可达到0.3%,而在经济较落后地区少见,近几年来在亚洲、南美以及非洲的一些新兴工业化国家,患病率正在持续上升。炎症性肠病的病理生理机制不明,主流观点认为主要是由肠道内的微生物诱发了机体的异常免疫反应所导致,其症状大多为非特异性,而诊断又缺乏金标准,需要综合判断并排除感染性肠炎和其他非感染性肠炎,因此存在着较为严重的漏诊误诊现象,目前缺乏高特异性的生物标记物作为其诊断工具。同时,该病目前无治愈的方式,只能通过药物、手术等缓解症状,延缓和减少复发,因此对疾病活动度的监控至关重要,内镜检查由于具有侵入性,无法作为常规的监测手段,目前在临床使用的诊断和监测指标主要包括钙卫蛋白、C反应蛋白和血沉三种,但均不具有特异性,同时敏感度特异度有限。因此本研究希望能够以外周血单个核细胞为材料,对其miRNA表达进行分析,寻找和验证新的对炎症性肠病具有诊断、鉴别诊断或监测作用的生物标记物。方法使用密度梯度离心法分离外周血中的单个核细胞,后提取其中的RNA进行测序和验证。通过对克罗恩病、溃疡性结肠炎及健康对照的外周血单个核细胞进行miRNA测序,得到其中具有表达差异的miRNA,通过聚类分析佐证其诊断和鉴别诊断作用,同时通过KEGG和GO富集分析对有差异表达的miRNA的靶标m RNA进行富集,探究不同疾病可能具有的特异性通路或分子功能,通过数据分析并结合相关文献,确定了7条候选miRNA进行后续大样本验证。在共164名受试者(克罗恩病87人,溃疡性结肠炎38人,健康对照39人)中采用q RT-PCR对候选miRNA表达量进行测定,结合其临床活动度评分、内镜活动度评分对候选miRNA的诊断、鉴别诊断和监测价值进行评估,并与超敏CRP、ESR、钙卫蛋白等指标进行比较评估其价值。结果miRNA测序共发现潜在的克罗恩病特异miRNA 34个,溃疡性结肠炎特异miRNA 51个,另有与两者均相关的miRNA 38个,结合测序结果、前人研究和文献检索在其中选定了mi R-92b-3p、mi R-96-5p、mi R-320b、mi R-542-5p、mi R-582-5p、mi R-941以及mi R-3065-5p 7条miRNA进行q RT-PCR验证。验证发现mi R-542-5p和mi R-582-5p均具有诊断炎症性肠病的价值,在诊断溃疡性结肠炎时,mi R-542-5p的ROC曲线下面积为0.775(95%CI 0.665-0.885,p<0.001),当截点值取1.15时,敏感度达到76.32%,特异度82.05%;同时mi R-582-5p的ROC曲线下面积为0.715(95%CI 0.594-0.836,p=0.001),当截点值取1.01时,敏感度达为64.86%,特异度78.95%;在诊断克罗恩病时mi R-542-5p的ROC曲线下面积达到了0.771(95%CI 0.687-0.855,p<0.001),当截点值取1.13时,敏感度达到72.41%,特异度82.05%;mi R-582-5p的ROC曲线下面积则为0.705(95%CI0.611-0.798,p<0.001),当截点值取1.03时,敏感度为60.92%,特异度78.95%。在疾病活动的监测上,mi R-96-5p在克罗恩病和溃疡性结肠炎中都表现出良好的监测疾病活动度作用。在克罗恩病中,其判断克罗恩病处于临床活动期的ROC曲线下面积为0.737(95%CI 0.623-0.852,p<0.001),当取截点为0.75时,敏感度为64%,特异度为77.42%,优于超敏CRP、ESR及钙卫蛋白,并且mi R-96-5p的表达量与克罗恩病的临床活动程度呈正相关(ρ=0.402,p<0.001)。同时mi R-96-5p亦可对克罗恩病内镜下活动度进行判断,其ROC曲线下面积为0.855(95%CI 0.695-1.000,p=0.029),当取截点为0.35时,敏感度为73.68%,特异度为100%,并且其表达量与内镜下活动度正相关(ρ=0.446,p=0.033)。在溃疡性结肠炎中,其判断疾病处于轻度以上活动的ROC曲线下面积为0.766(95%CI0.580-0.952,p=0.009),当取截点为0.87时,敏感度为83.3%,特异度为73.1%,判断性能与超敏CRP接近,高于ESR和钙卫蛋白,同时其表达量与Partial Mayo评分相关(ρ=0.371,p=0.022),也与Mayo评分相关(ρ=0.507,p=0.032)。结论外周血单个核细胞中的miRNA可以作为炎症性肠病诊断和活动度监测的生物标记物,mi R-542-5p和mi R-582-5p具有成为炎症性肠病诊断标记物的可能,而mi R-96-5p可以作为炎症性肠病活动度监测的工具,以减少不必要的侵入性检查。