【摘 要】
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目的：建立四环素调控的mPTA1／CD226转基因小鼠，对转基因小鼠胸腺细胞的发育进行研究。 方法：①使用pcDNA3-mPTA1和pBI-5载体构建用于四环素调控转基因小鼠制备的pBI-5-mPTA1载
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目的：建立四环素调控的mPTA1／CD226转基因小鼠，对转基因小鼠胸腺细胞的发育进行研究。 方法：①使用pcDNA3-mPTA1和pBI-5载体构建用于四环素调控转基因小鼠制备的pBI-5-mPTA1载体。②采用显微注射的方法将pBI-5-mPTA1载体片段导入B6D1F1小鼠受精卵，对新生小鼠耳成纤维细胞进行体外培养，用含rtTA的pUHD17.1质粒转染细胞，选出荧光素酶表达活性依赖Dox的小鼠。③将阳性小鼠与正常C57BL／6小鼠交配，分别使用mPTA1和荧光素酶(luciferase)引物对子代小鼠的基因组DNA进行PCR检测和鉴定，选取双阳性的Ptet-mPTA1转基因小鼠的F1代，将其继续与C57BL／6小鼠交配，不断得到子代小鼠，直至F4代以后。④将阳性的Ptet-mPTA1转基因小鼠与携带有tTA的EμSR-tTA转基因小鼠杂交，得到子代小鼠，同时使用mPTA1和tTA引物对其基因组DNA进行PCR检测，选取mPTA1和tTA双阳性的小鼠。⑤使用荧光素酶检测试剂盒对杂交的阳性小鼠的不同组织，如胸腺、脾脏、心脏、肾脏等进行
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