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蛋白质是细胞的重要组成物,在生命现象和生命过程中起着至关重要的作用。对蛋白质的定量分析检测在药学、生物化学、生物技术、临床医学及食品营养学领域有着十分重要的现实意义,其研究成果对解释蛋白质结构与功能的关系及蛋白质与物质或药物的作用机理具有指导意义。传统的蛋白质分析检测方法主要有凯式定氮法、考马斯亮蓝法、分光光度法、荧光光度法、化学发光法、近红外反射光谱法、双缩脲法等。但这些分析方法大都存在灵敏度较低、选择性差、稳定性弱及操作繁琐费时等局限。共振散射光谱法作为新兴的光谱分析技术,因其灵敏度高、选择性好、操作简便等优点而得到广泛应用,本文研究了共振散射光谱法用于痕量蛋白质的检测,论文主要研究内容包括:①酸性铬兰K-牛血清蛋白-OP体系的共振散射、二级散射和倍频散射光谱研究在PH3.2的邻苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液中,酸性格兰K可离解而以带负电荷的阴离子存在,而在此条件下牛血清蛋白质(BSA)处于其等电点(PI)之下,则以带多个正电荷的阳离子形式存在,两者可借助静电引力、氢键作用及疏水作用力而结合形成缔合物微粒。当溶液中存在非离子表面活性剂OP时,OP可与缔合微粒通过分子间作用力产生吸附结合,增大微粒粒径。此时将引起体系共振散射(RLS)、二级散射(SOS)和倍频散射(FDS)的显著增强,其最大RLS,SOS,FDS波长分别位于420nm、680nm和340nm。三种散射增强(ΔIRLS, ΔISOS和ΔIFDS)在一定范围内与蛋白质浓度成正比,方法线性范围分别是RLS为0-6.4mg/L、SOS为0-5.8mg/L;FDS为0-5.8mg/L;检出限分别为1.233μg/L (RLS)、1.121μg/L (SOS)、1.149μg/L (FDS),据此建立了灵敏的测定BSA的共振线性(RLS)和共振非线性光散射(RNLS)分析法。研究了反应体系的RLS、SOS和FDS光谱特征,并以RLS法考察了体系介质条件选择、PH值、共振探针用量、非离子表面活性剂OP浓度及共存物质等因素对散射体系的影响。结果表明方法选择性好,灵敏度高,操作简便,可用于血清、卵清和尿样中蛋白质的测定,回收率为99.44%~103.95%。②甲苯咪唑共振散射法用于蛋白质的痕量检测建立血液中痕量蛋白的共振散射(RLS)光谱分析方法。盐酸-甲苯咪唑(MEB)-牛血清白蛋白(BSA)体系的最大共振散射(RLS),二级散射(SOS),倍频散射(FDS)波长分别位于296nm、500nm和340nm。3种散射增强(ΔI)在一定范围内与蛋白质浓度成正比,方法线性范围分别是RLS为0.4-2.0mg/L、SOS为0.4-2.4mg/L;FDS为0.4-2.0mg/L;检出限分别为1.059μg/L (RLS)、1.324μg/L (SOS)、4.743μg/L (FDS)。该方法选择性好,灵敏度高,操作简便,可用于血清中蛋白质的测定,收率在97.9%-104.6%之间。③Mo(Ⅵ)-槲皮素-牛血清白蛋白体系的共振光散射及共振非线性散射光谱研究及应用在pH4.2的HAc-NaAc缓冲液中,Mo(Ⅵ)-槲皮素与牛血清白蛋白(BSA)的最大共振光散射(RLS)、二级散射(SOS)和倍频散射(FDS)波长分别为489nm、560nm和320nm。散射信号与BSA浓度在一定范围内呈线性增强,线性范围分别是RLS在0.2-1.0mg/L、SOS在0.2-0.8mg/L和FDS在0.2-1.0mg/L,对于BSA的检出限分别为0.207μg/L(RLS法)、0.248μg/L(SOS法)和0.700μg/L(FDS法),据此建立了灵敏的测定BSA的共振线性(RLS)和共振非线性光散射(RNLS)分析法。用于实际样品测定中,回收率在98.39%~104.29%之间。④硝酸铈在痕量蛋白质中的散射光谱研究建立痕量蛋白的共振散射(RLS)光谱分析方法。硝酸铈-十二烷基苯磺酸钠-牛血清白蛋白体系的最大共振散射(RLS),二级散射(SOS),倍频散射(FDS)波长分别位于288nm、500nm和320nm。3种散射增强(ΔI)在一定范围内与蛋白质浓度成正比,方法线性范围分别是RLS为1.0-2.2mg/L、SOS为1.0-2.6mg/L;FDS为1.0-2.6mg/L;检出限分别为0.0045mg/L (RLS)、0.0258mg/L (SOS)、0.0372mg/L(FDS)。该方法选择性好,灵敏度高,操作简便,可用于蛋白质的痕量检测,收率分别为97.92%、97.07%。⑤吖啶橙-十二烷基硫酸钠-蛋白质的共振散射光谱法研究在pH7.2的Tris-HCl缓冲液中,吖啶橙(AO)-十二烷基硫酸钠(SDS)-牛血清白蛋白(BSA)形成离子缔合物,导致共振光散射(RLS)显著增强,光谱最大散射波长位于309nm。体系的光散射强度与BSA浓度在一定范围内呈线性增强,线性范围是0.4~2.0mg/L,对于BSA的检出限为1.728μg/L。以RLS法考察了吖啶橙(AO)-十二烷基硫酸钠(SDS)-牛血清白蛋白(BSA)形成离子缔合物的适宜条件、影响因素等,此法可用于实际样品中蛋白含量的测定,回收率为99.62%~102.47%。