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乳清蛋白浓缩物(WPC)是生产婴幼儿配方粉的重要原料,牛乳乳清蛋白含有18-24%的a-乳白蛋白(a-La)和56-60%的β-乳球蛋白(β-Lg)。a-La是人乳中的重要蛋白成分,牛乳与人乳的a-La有72%的氨基酸序列完全一致;而β-Lg是一种重要的过敏原,人乳中不含这种蛋白。因此脱除WPC中的β-Lg对于生产低过敏、高母乳化的新型婴幼儿配方粉具有重要意义。本实验研究了如何利用蛋白酶进行优先降解WPC中的β-Lg。
确定了用SDS-PAGE电泳定量分析a-La和β-Lg的方法。a-La和β-Lg的进样量分别为0.40μg~1.20μg和0.48 μg~1.44μg,在此范围内a-La和B-Lg召的含量与电泳条带灰度的线性关系良好。用SDS-PAGE法测得WPC8200样品中a-La和e-Lg的含量分别为18.44%和45.68%。
选用了Flavourzyme(米曲霉)、Neutrase(枯草杆菌)、ProteaseA(米曲霉)、Protease N(枯草杆菌)、Protease S(嗜热脂肪芽孢杆菌)五种蛋白酶水解WPC8200,用TNBS法测定水解液的水解度,用SDS-PAGE电泳法分析水解液中的a-La和β-Lg的存余率。通过比较水解液中的a-La和β-Lg的存余率,筛选出ProteaseA具有优先降解WPC中β-Lg的能力。
通过单因素实验和正交实验设计,以水解度、蛋白存余率、水解物溶解性为指标,优化了Protease A优先降解β-Lg的工艺,即Protease A在40℃、pH 7.3、E/S为800(U/g蛋白),酶解时间为3h的条件下,优先降解β-Lg的效果最佳,水解产物中a-La和β-Lg的存余率分别为5.3%和1.4%,蛋白水解度为8.4%,并且水解产物的溶解性得到了显著改善(P<0.05)。