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性腺抑制激素(Gonad inhibiting hormone,GIH)是甲壳动物X器官窦腺复合体(XO-SG complexs)合成分泌的一种重要的神经多肽激素,对雌性和雄性的性腺发育起抑制作用。本文以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,利用SMARTer RACE技术克隆GIH的5’UTR(包含部分ORF),利用生物信息学对GIH序列和结构进行了分析预测,通过免疫组化技术研究了GIH蛋白在眼柄中的表达和分布,用荧光定量PCR技术检测了雌激素对GIH及眼柄激素对其它性腺发育相关基因(DMC1、VASA和VTG)表达的影响,主要结果如下:1. GIH基因的序列分析凡纳滨对虾GIH cDNA序列由865个核苷酸组成,其中5’端非编码区(5’UTR)有56bp,3’UTR(包括poly(A))有521bp,开放阅读框(ORF)有288bp,共编码96个氨基酸(包括17个氨基酸信号肽)。同源比对与进化关系显示,凡纳滨对虾GIH与斑节对虾GIH亲缘关系最近,同源性高达94%,与刀额新对虾同源性达63%,而与欧洲龙虾、美洲鳌虾、拟穴青蟹、青虾和鼠妇等甲壳动物GIH同源性均低于45%,与日本囊对虾、南美蓝对虾及中华绒螯蟹蜕皮抑制(MIH)同源性分别为77%、93%、89%。凡纳滨对虾GIH蛋白分子量为11158.05Da,等电点为9.15;其中Leu (L)含量最高,达到了13.5%,Arg (R)含量为11.5%,Asn (N)含量为8.3%;GIH存在两种可能的跨膜结构,一种在从内到外第3-20位氨基酸α螺旋处,另一种在从外到内为第1-20位的氨基酸α螺旋处;前17个氨基酸为信号肽;GIH亚细胞77.8%主要定位在细胞外(包括细胞膜),11.1%存在于空泡中,11.1%存在于内质网中;用SWISS-MODLE在线软件预测凡纳滨对虾GIH成熟肽的3D结构,发现GIH预测蛋白由五段α螺旋,结构简单,与斑节对虾MIH结构类似。2.GIH免疫组化分析GIH分泌细胞主要定位在XO-SG,少量定位在神经轴索中。XO中GIH分泌细胞主要定位在端髓和内髓,SG中GIH分泌细胞定位在外髓,且XO和SG荧光强度相近。3.雌二醇对GIH表达的影响GIH的表达量随凡纳滨对虾卵巢发育逐渐降低;雌二醇抑制眼柄GIH的表达,且分别与处理时间和浓度存在正相关。4.摘除眼柄与注射眼柄提取物对生殖相关基因表达的影响DMC1和VASA只在凡纳滨对虾精巢和卵巢中组织表达。摘除眼柄后,精巢和卵巢中DMC1表达量均显著性降低(P<0.05),而注射眼柄激素后精巢和卵巢中DMC1表达显著增高(P<0.05);相反,摘除眼柄后,精巢和卵巢中VASA以及卵巢中VTG表达量显著增高,而注射眼柄激素后VASA和VTG表达量显著降低。结果表明凡纳滨对虾GIH序列属于CHH家族II类多肽激素,与斑节对虾同源性最高,亲缘关系最近;GIH蛋白主要定位在XO-SG中,分散在端髓和外髓处,XO与SG荧光强度相近;17β-雌二醇对GIH存在负调控作用,并随处理时间和处理剂量GIH表达降低;眼柄粗提物可促进DMC1但抑制VASA和VTG的表达。