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背景： 原发性肝癌是全世界第6位常见的恶性肿瘤第2位恶性肿瘤致死病因，而我国原发性肝癌年发病例数及死亡数估计为46.6万和42.2万，约占全世界的50%，发病率和死亡率均明显高于全球平均水平，严重影响患者预期寿命及生活质量，给我国社会、医疗资源带来沉重压力。原发性肝癌病因主要包括慢性病毒性肝炎、酒精性肝病、黄曲霉毒素、非酒精性脂肪性肝病、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎等。原发性肝癌预后与癌症分期关系密切，临床上格外强调高危人群的定期筛查和早发现、早诊断、及时治疗。巴塞罗那分期系统早期（0～A期）、中期（B期）原发性肝癌可接受手术切除、肝移植或射频消融术治疗，预后相对较好；晚期（C期）、终末期（D期）预后极差。目前国内、国际肝癌临床指南推荐的诊断方法为增强CT、增强磁共振和超声造影，并建议高危人群定期检查肝脏超声和血清甲胎蛋白（AFP）。肝脏超声和血清AFP筛查发现早期HCC的敏感性不甚理想，总体效果难以令人满意，寻找灵敏、可靠而简便易行的早期筛查方法临床意义重大。miRNA （microRNA，微小 RNA）是单链非编码小 RNA，在机体内有重要调控作用，与多种恶性肿瘤的发病及进展有关。循环miRNA理化性质十分稳定，血清表达水平随疾病状态不同而变化巨大，是早期诊断标志物的理想候选者。但是，miRNA种类繁多，与肝癌的相互关系错综复杂，如何合理选择miRNA作为HCC早期无创筛查的标志物是一个难点，也是目前miRNA用于原发性肝癌筛查或早期诊断的研究热点所在。既往研究表明，单个miRNA诊断原发性肝癌的准确性比较差，目前的研究倾向于联合多个miRNA或AFP进行诊断，以提高诊断效能和准确性。 目的： 基于大型癌症基因组数据库资料筛选合适的miRNA组合，收集临床病例资料及血样进行验证，探索其在原发性肝癌中的诊断价值。 方法： 1. 从 TCGA 下载公开的原发性肝癌 miRNA 基因组测序数据，筛选差异表达的miRNA，用miRNA-靶点预测工具miRWalk 2.0进行分析，得到可能的靶基因；c-Bioportal上获取原发性肝癌常见突变基因，结合文献报道，筛选出发生频率高于5%的突变基因；两相比较，若某miRNA靶基因中含原发性肝癌高频突变基因，则定为候选miRNA。 2. 收集原发性肝癌、肝硬化和非肝病对照患者病历资料及血样85份，检测上述候选miRNA表达水平。 3. 差异表达的miRNA及AFP单独或联合进行诊断试验，评价诊断准确性；Logistic回归方程将所有差异表达的miRNA与AFP组合成单指标进行诊断试验，评价其诊断准确性。 4. 统计学方法：计量资料表示为均数±标准差或中位数+（最小值～最小值），计数资料（二分类及等级分类资料）用率或频数表述。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用方差分析，或非参数方法Tamhanes T2和Kruskal-Wallis检验，组间多重比较采用LSD或Bonferroni法检验，P<0.05认为差异具有统计学意义。 结果： 1. 生物信息学分析得到 8 个候选 hsa-miR-10b-5p、hsa-miR-214-3p、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-675-3p、hsa-miR-424-3p、hsa-miR-1258、hsa-miR-1269a。 2. 原发性肝癌组患者血浆miR-10b-5p的表达水平明显高于肝硬化组（P=0.028），而与非肝病对照组差别无统计学意义（P=0.664），肝硬化组与非肝病对照组之间的差异无统计学意义（P=0.062）；原发性肝癌组患者血浆miR-21-5p的表达水平明显高于肝硬化组（P=0.004）及非肝病对照组（P=0.011），肝硬化组与非肝病对照组之间的差异无统计学意义（P=0.0.976）。而miR-1258、miR-1269a在各组间未发现有统计学意义的差异（P=0.724，0.183）。 3. 以肝硬化作为对照，miR-10b-5p、miR-21-5p和AFP进行诊断试验的AUC（area under the receiver operating characteristic curve，受试者工作曲线下面积）分别为 0.651、0.730、0.731；两两或三者联合平行试验明显提高诊断的灵敏度，其中三者联合的灵敏度达到0.846；两两或三者联合系列试验提高诊断的特异度，本试验中系列试验的特异度甚至达到了顶峰（1.000）；利用Logistic回归方程将miR-10b-5p、miR-21-5p、miR-1258和AFP组合一个指标（预测概率），诊断效能得到显著改观（AUC=0.885），最佳截断点处的灵敏度和特异度分别达到了0.718和0.921。 结论： 1. 利用癌症基因组数据库可有效筛选目标miRNA用于原发性肝癌诊断； 2. 原发性肝癌患者血浆 miR-10b-5p、miR-21-5p 的表达水平明显高于肝硬化组，具 有一定诊断价值； 3. 单个 miRNA 诊断效能最低，平行试验和系列试验可分别提高灵敏度和特异度，Logistic回归模型法组合多指标诊断效能提升显著。