江苏是全国鲫鱼主要养殖地区之一,但自90年代起就一直遭受粘孢子虫病害的困扰,给养殖户造成了极大的经济损失,严重影响了江苏鲫鱼养殖业的发展。本研究通过对江苏地区鲫鱼寄生粘孢子虫种类的调查和分类研究,并建立洪湖碘泡虫的一种PCR快速检测方法,旨在为粘孢子虫的分类和生活史研究提供一些理论基础,并为鲫鱼粘孢子虫病防治提供一定的理论依据。1.鲫鱼寄生粘孢子虫种类调查与分类。作者在2011年7月到2012年4月期间,在江苏无锡、盐城、大丰、射阳、滨海等地区池塘养殖鲫鱼的鳃部、喉部、体表共检测到6种粘孢子虫,并通过形态学和18S rDNA序列的比对,对其进行分类鉴定,结果如下：卡特碘泡虫(M. cultus Yokoyama, Ogawa&Wakabayashi,1995)、吴李碘泡虫(M. wulii Landsberg&Lom,1991)、瓶囊碘泡虫(M. ampullicapsulatus Zhao等,2008)、洪湖碘泡虫(M. Honghuensis Liu等,2011)、多涅茨尾孢虫(Henneguya doneci Schhulman,1962)、武汉单极虫(Thelohanellus wuhanensis Xiao&Chen,1993),其中以由喉部寄生的洪湖碘泡虫引起的“喉孢子虫病”和由肝胰脏寄生的吴李碘泡虫引起的“腹孢子病”的危害最为严重,并利用NJ/ML/MP法构建粘孢子虫的系统发育树,分析验证了5种粘孢子虫的系统发育地位,补充了6种粘孢子虫形态学和5种粘孢子虫的18S rDNA信息。2.鲫鱼养殖塘放射孢子虫种类的调查和分类。为了掌握鲫鱼粘孢子虫的感染和传播途径,作者在2011年7月到2012年4月期间,在江苏常州、溧阳等地区暴发过粘孢子虫病的鲫鱼养殖塘开展媒介宿主和放射孢子虫种类调查。在池塘底泥中采集寡毛类,并从苏氏尾鳃蚓中发现了4种具有不同形态特征的放射孢子,即：Echinactinomyxon type1、Echinactinomyxon type2、Triactinomyxon type、Raabeia type.将这4种类型放射孢子虫的形态学数据与国内外文献中已记述的放射孢子虫的作比较,发现分别在寄生宿主、形态大小、等方面均有明显差异,因此,这4种放射孢子虫为国内外首次报道。利用18S rDNA序列比对的方法确定了Echinactinomyxon1为与鲫鱼肝部感染的吴李碘泡虫对应的放射孢子虫。3.洪湖碘泡虫巢式PCR检测技术。用无菌蒸馏水稀释到不同倍数(100,10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,10-7)的洪湖碘泡虫基因组DNA为模板,利用粘孢子虫18S rDNA通用引物[ERIB1(ACCTGGTTGATCCTG CCAG)和ERIB10(CTTCCGCAGGTTCACCTACGG)]作为外引物,洪湖碘泡虫特异引物[Nest-F (TCTTGATGCGGTGAGTGG)和Nest-R (ACATTACA CCCTGAGCGAG)]为内引物进行巢氏PCR,并做好空白对照,反应结束后将首轮和二轮PCR产物各取5μL混合琼脂糖电泳,结果显示：以ERIB1&10为引物单轮PCR反应仅能检测出稀释到10-1基因组DNA样品,而以Nest-F&R反应能检测出稀释到10-2和10-3基因组DNA样品,分别较ERIB1&10单轮PCR和Nest-F&R单轮PCR反应检测灵敏度高出2-3个数量级。