戊型肝炎病毒（HEV）是引起病毒性肝炎的主要原因之一。HEV可通过多种方式如粪-口途径、母婴传递和直接接触传播,使得戊型肝炎具有较高的流行性,每年约有2000万人感染,其中7万人死亡,特别是在孕晚期的女性感染者中死亡率高达25%。目前,仍没有治疗HEV感染的特异性靶向药物。最近研究表明,乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染可诱导细胞自噬,并且这种自噬有利于病毒复制,自噬抑制剂可能起到抑制病毒复制的作用。但目前自噬对HEV复制的调控作用还鲜有研究。本文将探究自噬对HEV复制的影响,以及天然自噬抑制剂抑制HEV复制的作用机制。具体研究方法及结果如下:1.以Human hepatoma Huh7细胞和HEV稳定转染的p6细胞为细胞模型,研究自噬对HEV复制的调控作用。通过荧光显微镜观察HEV感染前后细胞中自噬小体和酸性小体的数量变化、流式细胞仪分析HEV感染前后AO、MDC的荧光强度以及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II和P62的表达研究HEV对自噬的影响;通过测定自噬抑制剂3-methyladenine（3-MA）和chloroquine（CQ）对自噬及HEV复制的影响,研究自噬对HEV复制的调控作用。结果显示HEV感染可增加胞内自噬小体和酸性小体的数量,提高AO、MDC的荧光强度,增强Beclin-1和LC3-II的表达,抑制P62的表达,表明HEV感染可诱导自噬发生;3-MA和CQ处理可抑制Beclin-1和LC3-II的表达,增强P62的表达,并抑制HEV病毒的复制,表明HEV感染诱导的自噬可促进病毒复制。2.基于黄岑苷、Japonicone U、Japonicone V可诱导癌细胞自噬,以HEV稳定转染的p6细胞为细胞模型,研究这三种天然化合物对HEV复制的影响,筛选最优HEV抑制剂。利用cck-8测定三种化合物对p6细胞存活率的影响,在最大无细胞毒浓度下测定三种化合物对病毒复制的影响;测定筛选出的最优化合物抑制HEV复制的最佳作用时间及最佳作用浓度。结果表明三种化合物在最大浓度为50μM、10μM、1.5μM时对细胞存活率无显著影响;三种天然自噬抑制剂在最大无细胞毒浓度下均可抑制HEV复制,其中黄岑苷、Japonicone U对HEV复制的抑制率约为40%,Japonicone V对HEV复制的抑制率高达80%;Japonicone V抑制HEV复制的最佳作用时间为24 h,最佳作用浓度为1.5μM。3.以HEV稳定转染的p6细胞为细胞模型,研究Japonicone V对自噬的影响及对HEV复制的抑制机制。通过流式细胞仪测定Japonicone V添加前后自噬小体和酸性小体的数量变化,通过western blot测定Japonicone V添加前后自噬标志性蛋白LC3、Beclin1、SQSTM1/P62的表达;测定典型自噬诱导剂雷帕霉素（Rapamycin）和抑制剂氯喹（CQ）对Japonicone V自噬抑制活性和HEV复制抑制活性的影响;高通量转录组分析Japonicone V抑制HEV复制的信号通路,并采用Western blot验证。结果显示,Japonicone V处理可显著增加细胞内自噬小体和酸性小体数量,增强自噬标志性蛋白LC3、Beclin1的表达,降低自噬底物SQSTM1/P62的表达,表明Japonicone V处理可诱导p6细胞自噬;Rapamycin可显著降低Japonicone V抑制HEV复制的活性,增强病毒复制,CQ可增强Japonicone V对病毒的抑制率,表明Japonicone V通过抑制自噬抑制病毒复制;高通量转录组学分析结果显示Japonicone V可调节自噬、免疫、能量代谢等相关信号通路,Western blot结果显示Japonicone V处理确实激活了PI3K、AKT、m TOR、P38、JNK等与免疫、能量代谢相关蛋白的表达,表明Japonicone V通过激活PI3K/AKT/m TOR及MAPK信号通路抑制HEV感染诱导的细胞自噬,进而抑制HEV复制。